论文摘要
目的：通过研究广西不同地区人群乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）及黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）双暴露水平下P53基因的突变及其蛋白的表达水平,探讨P53基因在双暴露情况下与人肝细胞癌（Hepatocelluar carcinoma,HCC）发生、发展的关系。材料与方法：对广西不同地区82例HCC患者根据乙肝病毒与黄曲霉毒素的暴露情况,分为HBV（+）/AFB1（+）（实验组A）共44例；HBV（+）/AFB1（-）（对照组B）共15例；HBV（-）/AFB1（+）（对照组C）共15例；HBV（-）/AFB1（-）（对照组D）共8例。另收集20例肝血管瘤肝切除、肝移植供体肝组织作为正常肝组织对照组,分别为HBV（-）/AFB1（+）（正常肝组织对照组E）9例,HBV（-）/AFB1（-）（正常肝组织对照组F）11例。通过PCR直接测序与免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）法分别检测P53基因11对外显子的突变及蛋白的表达情况。结果：（1）82例HCC患者中P53基因的总突变率为46.3%（38/82）,P53基因的突变热点为249编码区,占总突变的86.8%（33/38）,249编码区以外的位点突变在总突变中为13.2%（5/38）；在P53exon7249中G→T突变率为90.9%（30/33）,G→C突变率为9.1%（3/33）。82例HCC组织中P53exon7 249阳性突变率为40.2%（33/82）,其中在实验组A和对照组B、对照组C和对照组D的阳性率分别为50%（22/44）、13.3%（2/15）、46.7%（7/15）、25%（2/8）。实验组A与对照组B、C、D总体比较,其差异无统计学意义（P>0.05）;组组之间进行比较,实验组A与对照组B比较,实验组A有更高的突变率（P<0.05）,其余各组之间比较其差异均无统计学意义（P>0.05）。（2）在P53蛋白表送方面,82例HCC患者中阳性表达率为74.4%（61/82）,其中在实验组A和对照组B、对照组C和对照组D的阳性率分别为90.9%（40/44）、46.7%（7/15）、73.3%（11/15）、37.5%（3/8）。其各组的IOD值分别为实验组A：1083.8412±1554.33693、对照组B：376.9396±343.64576、对照组C：795.9503±93075329、对照组D：148.1998±42.82685,正常肝组织对照组为：63.4710±33.83466。其中以P53蛋白阳性表达率为比较,实验组A与对照组B、C、D总体比较,实验组A具有较高的阳性表达率（P<0.05）；组组之间比较,实验组A分别与对照组B、对照组D比较,实验组A均具有更高的表达率（P<0.05）,其余各组之间比较其差异均无统计学意义（e>0.05）。在P53蛋白免疫组化累积光密度值（Integral opticaldensity, IOD）方面,实验组A与对照组B、C、D总体比较,实验组A具有较高的IOD值（P<0.05）；组组之间比较,实验组A与对照组D比较,实验组A有更高的IOD值（P<0.05）,对照组B与对照组D比较,对照组B有更高的IOD值（P<0.05）,对照组C与对照组D比较,对照组C有更高的IOD值（P<0.05）,其余各组之间比较其差异均无统计学意义（P>0.05）。（3） P53exon7 249突变与P53蛋白表达均阳性29例,P53exon7 249突变阳性、P53蛋白表达阴性与P53exon7249突变阴性、P53蛋白表达阳性分别为32例和4例。P53exon7 249突变与P53蛋白表达总体呈现相关性（P<0.05）;并通过组组比较分析,实验组A中P53exon7 249突变与P53蛋白表达存在一定相关性（P<0.05）；各对照组之间P53exon7 249突变与P53蛋白表达其相关性均无统计学意义（e>0.05）。结论：广西地区乙肝病毒/黄曲霉毒素双暴露的情况下,肝癌P53基因的突变及表达具有较高阳性率,其中P53exon7 249突变为其突变热点,为该地区肝癌常见的一分子生物学事件；P53基因的高突变率及高表达率可能与该地区乙肝病毒/黄曲霉毒素双暴露因素的协同作用有关。
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