慢性鼻窦炎和鼻息肉中miRNAs的差异性表达及其意义

论文摘要

第一部分慢性鼻窦炎和鼻息肉中miRNAs的差异性表达研究背景：慢性鼻窦炎（chronic rhinosinusitis，CRS）和鼻息肉（nasal polyps，NP）是鼻腔鼻窦的慢性炎症性疾病，它的发病机制尚未完全阐明。MicroRNA（miRNA）已被证明广泛参与免疫反应。我们对慢性鼻窦炎伴和鼻息肉及正常人群的miRNA（miR）进行差异性表达的研究，筛选出部分miRNA，验证表达的差异性。方法：采用miRNA芯片（miRNA array）方法对慢性鼻窦炎，鼻息肉和正常鼻粘膜miRNA的表达谱进行了检测分析。根据文献报道，筛选出miR-125b和miR-26a，用实时定量（real-time）逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chainreaction，RT-PCR）和原位杂交进一步验证芯片结果。结果：慢性鼻窦炎组中，有4种miRNAs表达上调，23种miRNAs表达下调；鼻息肉组织中，有7种miRNAs表达上调，69种miRNAs表达下调。实时定量RT-PCR显示miR-125b鼻息肉表达升高，且有统计学意义（P＜0.05）。miR-125b在BEAS-2B细胞上存在表达，miR-26a在BEAS-2B细胞无表达。miR-125b在人体鼻息肉组织的上皮表达上调。结论：miRNA在慢性鼻窦炎和鼻息肉的表达存在差异。miR-125b在鼻息肉中表达明显上调，可能与鼻息肉的发生发展有关。研究其调控方式，可为进一步探索鼻息肉的发病机制提供线索。第二部分MiR-125b表达上调在鼻息肉发病机制中的意义背景：miR-125b已被证明在鼻息肉表达增强。用生物信息学方法预测出4EBP1的3’非编码区与miR-125b有互补系列。4EBP1通过对Ⅰ型IFN信号通路有调控作用。我们对4EBP1是否为miR-125b的直接靶点进行验证，并对miR-125b是否通过调控4EBP1在鼻息肉发病中发挥作用进行了探讨。方法：采用免疫组织化学方法检测4EBP1在慢性鼻窦炎及鼻息肉中的表达情况。将miR-125b的mimic及inhibitor转染BEAS-2B细胞，24小时后采用免疫印迹法（Western blot）检测4EBP1蛋白质表达水平；构建将4EBP1 3’UTR的部分序列嵌入pGL3质粒，以构建pGL3-4EBP1质粒；重组质粒与miR-125b的mimic共转染BEAS-2B细胞，检测荧光素酶吸光度；实时定量RT-PCR用于检测慢性鼻窦炎及鼻息肉中IFN-β和IL-5 mRNA的表达水平有无差异，对IFN-β和IL-5 mRNA表达水平进行相关性分析。结果：免疫组化发现与正常对照比较，4EBP1蛋白质水平在鼻息肉出现下调；体外实验发现，分别上调和下调miR-125b水平后，4EBP1蛋白水平相应出现下降和升高。荧光素酶报告基因检测发现共转染重组有miR-125b互补结合序列的质粒和miR-125b mimic后，荧光素强度明显降低，提示miR-125b能抑制4EBP1的表达。实时定量RT-PCR显示与对照组相比，IFN-β和IL-5 mRNA在鼻息肉表达增强，且有统计学差异（P＜0.05）。慢性鼻窦炎及鼻息肉中IFN-β和IL-5 mRNA水平呈负相关（P＜0.05）。结论：4EBP1是miR-125b的直接靶向调控分子。miR-125b通过介导4EBP1的表达，在鼻息肉的发病中发挥作用。4EBP1表达水平能影响IFN-β产生量，可能对鼻粘膜天然免疫发挥影响。IFN-β在鼻粘膜不仅与天然免疫有关，而且与鼻息肉中Th1／Th2失衡关系密切。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 慢性鼻窦炎和鼻息肉中miRNAs的差异性表达研究
• 研究背景
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 miR-125b表达上调在鼻息肉发病机制中的意义
• 研究背景
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述 MicroRNA在免疫反应中的研究进展
• 致谢