人滑膜间充质干细胞/壳聚糖—明胶复合支架的相容性研究

论文摘要

目的检测冷冻干燥制备的壳聚糖-明胶支架与传代分离获取的人滑膜间充质干细胞的相容性。方法消化滑膜组织,传代分离滑膜细胞群,以获取滑膜间充质干细胞,并从形态学、细胞生物学和分化潜能等方面进行鉴定；冷冻干燥制备壳聚糖-明胶/纯壳聚糖支架,并检测支架的相关参数：密度、孔隙率、表面形貌、吸水性能和质量丢失性能；接种滑膜间充质干细胞于壳聚糖-明胶/纯壳聚糖支架上,于第3、7和10d进行扫描电镜观察和MTT分析。结果传代分离获取的细胞呈纺锤形/卫星形,细胞表达CD44、CD90和CD105,各自的阳性率依次为98%、94%和49%。壳聚糖-明胶复合支架孔壁薄,孔径范围为50μm～180μm,平均孔径约为130μm,且相邻孔隙间贯通率高,孔隙率为（75.87±3.70）%。而纯壳聚糖支架脆性高,孔壁厚,孔径大,平均孔径约为160μm,且降解缓慢。壳聚糖-明胶支架种植细胞后扫描电镜观察显示有大量滑膜间充质干细胞生长,且细胞形态呈纺锤形／卫星形,MTT分析显示其A值关系为10d（1.43±0.11）>7d（1.35±0.08）>3d（0.43±0.08）（P<0.05）,且均大于其同期的纯壳聚糖对照的A值（0.1352±0.0715,0.2710±0.0741,0.4936±0.0671）（P<0.05）。结论壳聚糖-明胶支架的人滑膜间充质干细胞相容性优于纯壳聚糖支架。

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Abstract

前言

一、滑膜间充质干细胞获取、培养和鉴定

实验材料与方法

1 实验药品与仪器

2 实验方法

2.1 试剂的配制

2.2 滑膜标本的收集

2.3 滑膜间充质干细胞的消化分离过程

2.4 滑膜间充质干细胞的冻存

2.5 滑膜间充质干细胞的复苏

2.6 细胞染色拍照

2.7 细胞表型的检测

2.8 关节软骨和骨诱导

2.9 免疫组织化学染色

结果

讨论

小结

二、壳聚糖-明胶支架的制备

实验材料与方法

1 实验药品与仪器

2 实验步骤

2.1 壳聚糖-明胶多孔支架的制备

2.2 支架材料密度测定

2.3 扫描电镜观察

2.4 支架材料孔隙率的测定

2.5 支架材料吸水性能的测定

2.6 支架质量丢失性能的测定

2.7 数据统计分析

结果

讨论

小结

三、人滑膜干细胞/壳聚糖-明胶支架相容性实验研究

实验材料与方法

1 实验药品与仪器

2 实验步骤

2.1 缓冲液——无菌PBS的配制

2.2 完全培养液——10%FBS/DMEM

2.3 多孔支架的细胞种植

2.4 扫描电镜观察

2.5 MTT检测

2.6 数据统计分析

结果

讨论

小结

全文结论

参考文献

参与文章和科研情况说明

致谢

附录一

附录二

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