论文摘要
目的:观察碱性成纤维细胞生长因子bFGF(basic fibroblast growth factor)和缺血预处理联合应用于SD大鼠带真皮下血管网皮片对细胞增殖,血管化进程,以及皮片成熟面积的影响。皮肤移植是手外科主要治疗方法之一,移植皮片成功的基础是皮片与受皮区之间的血运建立,而血管形成(即组织中新生血管的增殖和形成过程)是构建这种血运关系的基础和关键。缺血预处理和bFGF可以加速植皮区与受皮区之间的血运建立,提高皮片移植的成活率,对解决带真皮下血管网皮片移植后因皮片较厚,从供区获得血供的时间较长,较困难,常出现局灶性表皮层或真皮层坏死,散在的水疱干枯脱痂后形成花斑等问题有积极意义。bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)是人体内最为有效的血管形成因子之一,是成纤维细胞、血管内皮细胞及血管平滑肌细胞的高效促生长剂,能够强烈促进新生毛细血管的形成,改善创面微循环,为组织修复提供所必须的氧和丰富的营养物质。缺血预处理引起的皮片保护作用会立即产生并可维持24小时,加强了细胞对缺血的耐受能力,从而引发了缺血预处理的保护效应。本实验主要是通过研究带真皮下血管网皮片基底血运被阻断时皮片成活和边缘血运的建立情况,为临床提高带真皮下毛细血管网皮片移植的成功率提供实验依据和临床依据。方法:将40只健康SD大鼠随机分为A、B、C、D四组。A组为对照组,B组为缺血预处理组,C组为缺血预处理加生理盐水组,D组为缺血预处理加bFGF组。A组:鼠背脱毛、消毒,取1×1cm2,2×2 cm2, 3×3 cm2正方形皮片,间距3厘米。带真皮下血管网皮片的形成过程如下:逐层切开皮肤、皮下组织,于深筋膜浅面将皮片掀起,创面彻底止血,用眼科剪修去皮片的大部分皮下组织,保留皮下脂肪约1.5~3mm(包括背部肉膜层,在背部肌膜的浅面进行),皮片基底与受皮区基底塞入片状硅胶膜以阻断基底血供,将皮片对边扭转180度,直接原位缝合;B组:设计皮片同A组,皮片切取时,仅切透皮片四边,于术后72小时再彻底游离皮片基底部,并掀起皮片,皮片基底与受皮区基底塞入片状硅胶膜以阻断基底血供,原位缝合;C组:设计皮片同A组,分别切透已设计好的皮片四边,于术后72小时后游离基底部,皮片基底与受皮区基底塞入片状硅胶膜以阻断基底血供,以生理盐水浸泡皮片及受区周缘软组织,原位缝合皮片;D:皮片设计同A组,分别切透已设计好的皮片四边,术后72小时游离基底部,于皮片及受区创面周缘软组织内应用碱性成纤维细胞生长因子溶液36000AU/15mL bFGF浸泡10min后,皮片基底与受皮区基底塞入片状硅胶膜以阻断基底血供,原位缝合,7天后观察皮片的各项指标。观察指标:1、观察皮片的颜色、质地、弹性和边缘渗血情况。2、皮片成活面积:皮片形成后第1周,数码相机记录图像分析测量皮片成活部分的最长径、最宽径,面积及面积成活百分比。3组织学观察:于创缘周边取病理切片,HE染色,于等宽的面积内随机选取5个高倍镜视野,计算新生血管的数量及肉芽组织增生情况进行显微镜下观察及数据测量。结果:大体观察:40只SD大鼠术后全部喂养成活,以皮片质地变硬、失去弹性、颜色变黑为判断皮片坏死的标准,测量皮片成活面积。切取范围为1cm2大小的各组皮片几乎完全成活,四组皮片成活面积和成活部分平均宽度无明显差异(P>0.05);4cm2和9cm2大小的各组皮片均出现中心部分不同程度的坏死,表皮部分坏死剥脱,皮肤色黑、质硬,失去弹性,皮片四边周缘出现宽度不等不规则的成活区,色泽稍暗,质地弹性可,四个处理组皮片成活面积和成活部分平均宽度均有统计学意义(P<0.05),Q检验结果显示:除B组与C组比较无差别外,其余各组间比较均有差别。D组皮片成活面积明显高于A、B、C三组,B、C两组皮片成活面积高于A组。组织学观察:(1)四组皮片坏死区组织学形态相似,均表现为急性炎症,中性粒细胞、单核细胞浸润,肌层坏死(2)各组皮片成活区表现:A组带真皮下血管网皮片皮肤组织层次破坏严重,大量中性粒细胞及单核细胞浸润,可见少量萎缩血管,罕见新生毛细血管,B、C组真皮深层可见少量毛细血管,管腔较大,管壁完整性较好,D组皮片成活区新生血管密度、肉芽组织形成均明显高于其它组,血管增生明显,全层炎性细胞浸润较其它组轻,大量肉芽组织形成,大量新生血管,新生血管主要表现为毛细血管。当带真皮下血管网皮片切取范围1 cm2时,四组皮片新生毛细血管数量无明显差异(P>0.05)。当带真皮下血管网皮片切取范围为4cm2和9 cm2时,四个处理组均有统计学意义(P<0.05),Q检验结果显示:除B组与C组比较无差别外,其余各组间比较均有差别。D组皮片成活部分新生毛细血管数量明显高于A、B、C三组,B、C两组皮片新生毛细血管数量高于A组。结论:(1)带真皮下毛细血管网皮片应用bFGF浸泡后肉芽组织增生明显,增加了肉芽组织及移植皮片中血管的数量,说明bFGF对肉芽组织中成纤维细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞等的增殖与分化有促进作用,为肉芽组织的生长、皮片的成活愈合提供了较好的营养环境,为移植皮片的成活愈合提供了基础。(2)带真皮下血管网皮片经过缺血预处理后,加强了细胞的耐缺血能力,并可以使皮片周缘形成更多的新生毛细血管,加快毛细血管化的进程,从而加快肉芽组织的生长速度。(3)通过本实验观察表明带真皮下血管网皮片基底血运被阻断时,依靠边缘血管吻接的方式建立血运仍能成活,为临床提高带真皮下毛细血管网皮片移植的成功率提供实验依据和临床依据。
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