一次免疫神经氨酸酶DNA疫苗抗流感病毒研究

论文摘要

流感是一种烈性传染性疾病,每年造成很多人的死亡。DNA疫苗作为一种前景广阔的疫苗已广泛应用于流感病毒预防研究。本论文分三个部分介绍我们在DNA疫苗研究方面的工作: Ⅰ.我们以前的研究表明NA、HA DNA疫苗在小鼠模型上诱导的免疫反应可以提供抗流感病毒保护,但是一般需要给小鼠接种两次NA或HA DNA疫苗才能够完全保护。为了简化免疫程序,本研究采用了一次免疫策略来检测NA、HA DNA疫苗的免疫效果。我们用电穿孔的方法给小鼠接种一次NA DNA或HA DNA,检测其保护小鼠的能力。BALB/c小鼠接种一次30μg NA、HA,在小鼠免疫后的第4周、第28周分别用致死量(40×LD50)流感病毒攻击。实验表明接种一次30μg NA不但能在免疫后4周保护小鼠,而且在免疫后28周仍然能够保护。接着,我们又对接种一次NA DNA进行了剂量研究。实验表明,小鼠接种5μg NA就能在致死量流感病毒攻击下存活,接种了低于这个剂量的小鼠在攻击后1周全部死亡。最后,我们检测了NA DNA在新生小鼠体内的保护作用,结果发现,一日龄和一周龄小鼠免疫了30μg NA后在致死量病毒攻击下存活数量具有显著的统计学意义。在以上实验中接种一次30μg HA的小鼠在攻击后的存活数都没有统计学意义。综合以上实验结果,NA作为一种简单有效的DNA疫苗,对预防流感有积极意义。 Ⅱ.本部分旨在以小鼠为动物模型,研究母体免疫流感病毒血凝素（hemagglutinin,HA）DNA疫苗对子代小鼠的保护作用。在本实验中,雌

论文目录

• 第一章 流感病毒及其疫苗研究
• 1. 流感病毒及其危害
• 2. 流感病毒疫苗研究
• 2.1 灭活疫苗
• 2.2 亚单位疫苗
• 2.3 减毒活疫苗
• 2.4 合成肽疫苗
• 2.5 基因缺失和基因突变活疫苗
• 2.6 活病毒载体疫苗
• 2.7 基因工程亚单位疫苗
• 2.8 DNA疫苗
• 3. 本文研究目的
• 4. 实验方案路线图
• 5. 论文的结构
• 第二章 一次免疫NA DNA疫苗抗流感病毒研究
• 引言
• 第一节 材料与方法
• 1、材料
• 1.1 大肠杆菌菌株
• 1.2 载体和质粒
• 1.3 动物、病毒和细胞
• 1.4 主要试剂
• 1.5 主要仪器设备
• 1.6 所需溶液
• 2、方法
• 2.1 电转化感受态细胞制备
• 2.2 细菌的转化
• 2.3 质粒的小量制备
• 2.4 重组质粒通过测序鉴定
• 2.5 重组质粒的大量抽提纯化
• 2.6 测量 DNA的浓度
• 2.7 A/PR/8/34半数致死量（LD50）测定
• 2.8 免疫和病毒攻击
• 2.9 样本采集
• 2.10 抗NA抗体测定
• 2.11 抗HA抗体测定
• 2.12 病毒滴度测定
• 2.13 统计学分析
• 第二节 结果分析
• 1. 一次免疫NADNA疫苗后4周能够保护小鼠抗致死量流感病毒攻击
• 2. 一次免疫NADNA疫苗后28周能够保护小鼠抗致死量流感病毒攻击
• 3. 一次免疫不同量NADNA疫苗效果比较
• 4. 新生小鼠接种一次NADNA能够抵御致死量流感病毒攻击
• 第三节 讨论
• 1. 抗NA抗体的保护效果
• 2. NA分子是抗流感病毒的重要疫苗成分
• 3. 流感病毒灭活疫苗的改良方案
• 4. WHO推荐一次免疫的接种方案
• 5. DNA疫苗能诱导新生小鼠产生保护性免疫应答
• 第四节 实验结论
• 参考文献
• 第三章 母体免疫流感疫苗对子代的保护作用
• 引言
• 第一节 材料与方法
• 1.1 DNA疫苗及灭活疫苗
• 1.2 实验动物
• 1.3 小鼠免疫
• 1.4 HA特异性抗体测定
• 1.5 病毒攻击
• 1.6 统计学分析
• 第二节 结果分析
• 3.1 子代小鼠体内抗体效价测定及抗体分型
• 3.2 HADNA诱导的母源抗体能保护2周龄小鼠
• 第三节 讨论
• 参考文献
• 第四章 母源抗体干扰下的DNA疫苗免疫效果评价
• 引言
• 第一节 材料与方法
• 1.1 DNA疫苗及灭活疫苗
• 1.2 实验动物
• 1.3 小鼠免疫
• 1.4 HA特异性抗体测定
• 1.5 病毒攻击
• 1.6 统计学分析
• 第二节 结果分析
• 2.1 子代小鼠免疫HADNA后抗体变化比较
• 2.2 病毒攻击后小鼠的存活率的体重变化
• 第三节 讨论
• 参考文献
• 结语
• 缩写表
• 读研期间文章发表和录用情况
• 致谢
• 湖南师范大学学位论文原创性声明