水稻白叶枯病菌PXO99~A中PhaR基因功能的初步研究

论文摘要

水稻白叶枯病菌Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo)引起水稻上重要的细菌病害。在对水稻白叶枯病菌PXO99A的研究中发现存在有PhaR基因,该基因可以编码一种PHAs(聚羟基脂肪酸酯)颗粒相关的蛋白。PHAs (聚羟基脂肪酸酯)是一种细胞内碳和能量的储藏物质,多种微生物在一定条件下能在胞内积累PHAs作为碳源和能源的贮存物,PHAs比糖原、多聚磷酸或脂肪更加普遍地存在于微生物中。本研究采用基因敲除的方法构建PhaR基因的缺失突变体,通过缺失突变体和野生型菌的性状对比,来进一步研究该基因的功能。首先通过重叠延伸PCR的方法来构建用于PhaR缺失突变的重组体pMDPhaRF1F2,将其导入PXO99A后,筛选抗卡那霉素的PXO99转化子。利用PCR验证法筛选发生双交换的缺失突变体PXO△PhaR.经缺失突变体与野生型菌株性状比较发现,缺失突变体PXO△PhaR的菌落形态与野生型菌有着较明显的差异、游动性减弱,菌体生长缓慢,并且产生EPS的能力减弱；而在产淀粉酶和耐H2O2胁迫方面,则与野生型菌株无差异。烟草过敏反应和水稻致病性测定发现,缺失突变体PXO△PhaR在烟草上激发HR反应,但对水稻的致病性减弱。由此可见,PhaR基因影响着黄单胞菌菌落形态等一系列性状,并且影响黄单胞菌的致病性。从表型上可以发现,缺失突变体在产生胞外多糖方面与野生型菌有着十分明显的差异,而胞外多糖也是很重要的一个致病因子。对于PhaR基因在黄单胞菌对水稻的致病性中是如何起作用的,还有待进一步研究。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 文献综述
• 第—章 PhaR基因缺失突变体的构建
• 1 材料和方法
• 1.1 供试菌株和质粒
• 1.2 培养基、抗生素和培养温度
• 1.3 电泳缓冲液及主要试剂
• 1.4 引物
• 1.5 实验方法
• 2 结果和分析
• 2.1 PhaR基因缺失重组体的构建
• 2.2 pMDT-PhaRF1F2的酶切验证
• 2.3 水稻白叶枯病菌PhaR基因标记交换的突变体的获得
• A中PhaR缺失突变体的菌落PCR验证'>2.4 PXO99^A中PhaR缺失突变体的菌落PCR验证
• 3 讨论
• 第二章 缺失突变体PXO △ PhaR生物学形态研究
• 1 材料和方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基、抗生素和培养温度
• 1.3 实验方法
• 2 结果与分析
• A突变体的菌落形态观察'>2.1 PXO99^A突变体的菌落形态观察
• A突变体的淀粉酶测定'>2.2 PXO99^A突变体的淀粉酶测定
• A突变体对H₂O₂抗逆性测定'>2.3 PXO99^A突变体对H₂O₂抗逆性测定
• A突变体的游动性测定'>2.4 PXO99^A突变体的游动性测定
• A突变体产EPS能力的测定'>2.5 PXP99^A突变体产EPS能力的测定
• A突变体在培养基中的生长曲线'>2.6 PXO99^A突变体在培养基中的生长曲线
• 3 讨论
• 第三章 缺失突变体PXO△PhaR对烟草过敏反应的测定和对水稻致病性的测定
• 1 材料和方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 供试植物
• 1.3 培养基、抗生素和培养温度
• 2 实验方法
• 2.1 烟草过敏反应测定
• 2.2 致病性测定
• 3 结果与分析
• A突变体的烟草过敏反应'>3.1 PXO99^A突变体的烟草过敏反应
• A突变体的致病性测定'>3.2 PXO99^A突变体的致病性测定
• 4 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 英文名称及缩写词
• 附录 本论文涉及质粒的图谱及其特性
• 致谢