论文摘要
背景:卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤,在女性生殖系统恶性肿瘤中是导致女性死亡的主要原因。目前国际公认的卵巢癌治疗方法为肿瘤细胞减灭术联合基于铂为一线化疗药的化学疗法。因此,化疗在卵巢癌的治疗中就起着至关重要的作用。然而,化学耐药的出现制约了化疗的发展,使得化疗在临床治疗卵巢癌的疗效不尽人意。大量研究表明光动力学疗法在治疗卵巢癌和其他妇科疾病中具有巨大的潜力。但是,光动力学疗法能否灭活耐药卵巢癌还有待阐明。本研究旨在利用LED新型光源介导光动力作用探讨其对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP细胞的灭活作用。材料与方法:采用流式细胞仪检测COC1/DDP细胞内MPPa的荧光强度从而了解MPPa的吸收规律;采用倒置显微镜观察和MTT比色法检测LED活化MPPa光动力作用后COC1/DDP细胞的生长情况;同时利用测温仪对实验中细胞溶液的温度进行监测,以了解细胞溶液的温度变化情况;应用流式细胞术检测和Hoechst33258细胞核荧光染色法观察LED活化MPPa介导的光动力作用对COC1/DDP细胞凋亡的影响;通过透射电镜观察光动力作用后细胞超微结构的变化情况;利用激光扫描聚焦显微镜和细胞器探针染色法观察MPPa的亚细胞定位;最后通过Rhodamine123染色法了解细胞线粒体膜电位变化情况。结果:COC1/DDP细胞内MPPa平均荧光强度值随着孵育时间逐渐增大,18小时左右达到最大值,后渐趋平台期;LED活化MPPa介导的光动力作用显著抑制了COC1/DDP细胞的生长,在一定MPPa浓度和一定LED光能密度条件下,细胞生长抑制作用呈浓度光密度剂量依赖关系;倒置显微镜下观察到MPPa介导的光动力组细胞数量较其他对照组明显减少,细胞固缩;单纯MPPa对细胞没有细胞毒性作用,而单纯的LED照射结果显示有促进细胞增殖作用;实验中温度变化监测显示温度变化随LED光照时间有升高,但是增高不显著,室温(25℃)条件下最高达29℃;Hoechst33258细胞核染色示LED(1 J/cm~2)活化MPPa(2μM)介导的光动力组出现核凝聚、凋亡小体;同时流式细胞术检测细胞凋亡率发现MPPa介导的光动力组,在光动力作用6小时后细胞凋亡率达16.71%;透射电镜观察到MPPa介导的光动力组,在光动力作用6小时后细胞出现坏死和许多凋亡小体;亚细胞定位显示MPPa在COC1/DDP细胞的内质网,高尔基体和线粒体中有浓聚,而在溶酶体中有部分聚集;最后Rhodamine123染色对COC1/DDP细胞线粒体膜电位检测显示MPPa介导的光动力组,在光动力作用6小时后细胞内线粒体膜电位明显降低。结论:LED活化MPPa介导的光动力作用能够有效的灭活人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,PDT可以作为一种很有潜能的治疗模式对耐药卵巢进行治疗;LED可以作为一种新型的光源应用于光动力实验和临床治疗;MPPa作为一种新型的光敏剂有潜在的推广和应用价值。
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