本文主要研究内容
作者陈博堃（2019）在《传染性皮下及造血组织坏死病毒对克氏原螯虾的感染研究》一文中研究指出：传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus,IHHNV)也称为细角滨对虾浓核病毒(Penaeus stylirostris densovirus,PstDNV)或十足类浓核病毒(Decapod penstyldensovirus 1,PstDV1)。IHHNV宿主较为广泛,可感染细角滨对虾(Litopenaeus stylirostris)、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)和斑节对虾(Penaeus monodon)等重要水产养殖物种,给世界范围的对虾养殖行业造成了巨大经济损失,是世界动物卫生组织(The World Organisation for Animal Health,OIE)规定的须向其申报的甲壳动物重要病原。IHHNV于1981年首次发现于美国太平洋地区,2001年在我国首次报道,目前已在全国范围内广泛流行,是严重危害我国对虾养殖业的主要病毒之一。克氏原螯虾(Procambarus clarkii)又名小龙虾,是目前我国最重要的水产养殖物种之一。可感染克氏原螯虾的病原较多,其中危害最严重的病毒—白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)早在2004年就已获得证实,但有关IHHNV感染克氏原螯虾的研究却鲜有报道。本研究发现并首次报道了IHHNV可感染克氏原螯虾,证明了IHHNV的淡水传播可能;基于SYBR Green建立了一种特异性实时荧光定量PCR检测方法,分析比较了IHHNV在克氏原螯虾不同组织器官内的浓度差异;并通过高通量测序研究了克氏原螯虾感染IHHNV前后的转录组,分析了克氏原螯虾感染IHHNV前后的差异蛋白和差异基因。主要内容及结果如下:1.通过组织学和分子生物学方法证实克氏原螯虾在在自然和实验条件下均会被IHHNV感染。通过普通PCR检测野生样品发现,9只野生克氏原螯虾样品中有3只呈IHHNV阳性。在攻毒实验中,普通PCR检测结果发现实验组的20只克氏原螯虾全部为IHHNV阳性,且死亡率高达95%,远高于对照组;将克氏原螯虾鳃制成组织切片后显微观察发现,IHHNV阳性样品较IHHNV阴性样品能明显观察到异常肿大的细胞核。2.基于荧光染料SYBR Green建立了一种特异性检测IHHNV的实时荧光定量PCR方法。设计一对特异性引物IHHNV195F(5’GGGAGTTACCTTTGCTGC3’)和IHHNV195R(5’GGTCCGTCTACTGCGTCT 3’,GenBank:KM485613.1),可扩增产生195 bp的DNA片段。经检测发现该引物对IHHNV有高度特异性,不与对虾白斑综合征病毒(WSSV)、肝胰腺细小病毒(Hepatopancreatic parvo-like virus,HPV)、传染性肌肉坏死病毒(Infectious myonecrosis virus,IMNV)、虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP),黄头病毒(Yellow-head virus,YHV)以及健康虾DNA出现交叉反应。本方法最低可检测1拷贝IHHNV质粒,可达到探针法荧光定量PCR的高灵敏度,同时具有染料法便捷、价廉的优点。3.利用建立的实时荧光定量PCR方法检测攻毒实验克氏原螯虾不同组织器官(鳃、肝胰脏、血淋巴以及肌肉)受IHHNV感染情况,发现鳃是IHHNV敏感器官。4.通过高通量测序转录组分析比较受IHHNV感染克氏原螯虾与健康克氏原螯虾间基因表达差异。分析比较后得到了237个差异表达基因,并利用荧光定量PCR方法验证了12条显著差异基因。KEGG通路富集结果显示,大量差异表达基因与克氏原螯虾摄食及代谢有关,免疫相关基因主要与重要的先天免疫手段--细胞凋亡有关。
Abstract
chuan ran xing pi xia ji zao xie zu zhi huai si bing du (Infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus,IHHNV)ye chen wei xi jiao bin dui ha nong he bing du (Penaeus stylirostris densovirus,PstDNV)huo shi zu lei nong he bing du (Decapod penstyldensovirus 1,PstDV1)。IHHNVsu zhu jiao wei an fan ,ke gan ran xi jiao bin dui ha (Litopenaeus stylirostris)、fan na bin dui ha (Litopenaeus vannamei)he ban jie dui ha (Penaeus monodon)deng chong yao shui chan yang shi wu chong ,gei shi jie fan wei de dui ha yang shi hang ye zao cheng le ju da jing ji sun shi ,shi shi jie dong wu wei sheng zu zhi (The World Organisation for Animal Health,OIE)gui ding de xu xiang ji shen bao de jia ke dong wu chong yao bing yuan 。IHHNVyu 1981nian shou ci fa xian yu mei guo tai ping xiang de ou ,2001nian zai wo guo shou ci bao dao ,mu qian yi zai quan guo fan wei nei an fan liu hang ,shi yan chong wei hai wo guo dui ha yang shi ye de zhu yao bing du zhi yi 。ke shi yuan ao ha (Procambarus clarkii)you ming xiao long ha ,shi mu qian wo guo zui chong yao de shui chan yang shi wu chong zhi yi 。ke gan ran ke shi yuan ao ha de bing yuan jiao duo ,ji zhong wei hai zui yan chong de bing du —bai ban zeng ge zheng bing du (White spot syndrome virus,WSSV)zao zai 2004nian jiu yi huo de zheng shi ,dan you guan IHHNVgan ran ke shi yuan ao ha de yan jiu que xian you bao dao 。ben yan jiu fa xian bing shou ci bao dao le IHHNVke gan ran ke shi yuan ao ha ,zheng ming le IHHNVde dan shui chuan bo ke neng ;ji yu SYBR Greenjian li le yi chong te yi xing shi shi ying guang ding liang PCRjian ce fang fa ,fen xi bi jiao le IHHNVzai ke shi yuan ao ha bu tong zu zhi qi guan nei de nong du cha yi ;bing tong guo gao tong liang ce xu yan jiu le ke shi yuan ao ha gan ran IHHNVqian hou de zhuai lu zu ,fen xi le ke shi yuan ao ha gan ran IHHNVqian hou de cha yi dan bai he cha yi ji yin 。zhu yao nei rong ji jie guo ru xia :1.tong guo zu zhi xue he fen zi sheng wu xue fang fa zheng shi ke shi yuan ao ha zai zai zi ran he shi yan tiao jian xia jun hui bei IHHNVgan ran 。tong guo pu tong PCRjian ce ye sheng yang pin fa xian ,9zhi ye sheng ke shi yuan ao ha yang pin zhong you 3zhi cheng IHHNVyang xing 。zai gong du shi yan zhong ,pu tong PCRjian ce jie guo fa xian shi yan zu de 20zhi ke shi yuan ao ha quan bu wei IHHNVyang xing ,ju si wang lv gao da 95%,yuan gao yu dui zhao zu ;jiang ke shi yuan ao ha sai zhi cheng zu zhi qie pian hou xian wei guan cha fa xian ,IHHNVyang xing yang pin jiao IHHNVyin xing yang pin neng ming xian guan cha dao yi chang zhong da de xi bao he 。2.ji yu ying guang ran liao SYBR Greenjian li le yi chong te yi xing jian ce IHHNVde shi shi ying guang ding liang PCRfang fa 。she ji yi dui te yi xing yin wu IHHNV195F(5’GGGAGTTACCTTTGCTGC3’)he IHHNV195R(5’GGTCCGTCTACTGCGTCT 3’,GenBank:KM485613.1),ke kuo zeng chan sheng 195 bpde DNApian duan 。jing jian ce fa xian gai yin wu dui IHHNVyou gao du te yi xing ,bu yu dui ha bai ban zeng ge zheng bing du (WSSV)、gan yi xian xi xiao bing du (Hepatopancreatic parvo-like virus,HPV)、chuan ran xing ji rou huai si bing du (Infectious myonecrosis virus,IMNV)、ha gan chang bao chong (Enterocytozoon hepatopenaei,EHP),huang tou bing du (Yellow-head virus,YHV)yi ji jian kang ha DNAchu xian jiao cha fan ying 。ben fang fa zui di ke jian ce 1kao bei IHHNVzhi li ,ke da dao tan zhen fa ying guang ding liang PCRde gao ling min du ,tong shi ju you ran liao fa bian jie 、jia lian de you dian 。3.li yong jian li de shi shi ying guang ding liang PCRfang fa jian ce gong du shi yan ke shi yuan ao ha bu tong zu zhi qi guan (sai 、gan yi zang 、xie lin ba yi ji ji rou )shou IHHNVgan ran qing kuang ,fa xian sai shi IHHNVmin gan qi guan 。4.tong guo gao tong liang ce xu zhuai lu zu fen xi bi jiao shou IHHNVgan ran ke shi yuan ao ha yu jian kang ke shi yuan ao ha jian ji yin biao da cha yi 。fen xi bi jiao hou de dao le 237ge cha yi biao da ji yin ,bing li yong ying guang ding liang PCRfang fa yan zheng le 12tiao xian zhe cha yi ji yin 。KEGGtong lu fu ji jie guo xian shi ,da liang cha yi biao da ji yin yu ke shi yuan ao ha she shi ji dai xie you guan ,mian yi xiang guan ji yin zhu yao yu chong yao de xian tian mian yi shou duan --xi bao diao wang you guan 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自鲁东大学的陈博堃，发表于刊物鲁东大学2019-10-21论文，是一篇关于克氏原螯虾论文,转录组测序论文,鲁东大学2019-10-21论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自鲁东大学2019-10-21论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：克氏原螯虾论文; 转录组测序论文; 鲁东大学2019-10-21论文;