猪链球菌病病原流行病学研究及防制措施

论文摘要

猪链球菌（Streptococcus suis）是现代危害养猪业的一种重要的病原，几乎世界各国都有发生。由于链球菌血清型较多，抗原结构复杂，在临床上呈现不同的症状，如败血症、脑膜脑炎、心内膜炎、肺炎、化脓性淋巴结炎、关节炎等，还常常与其他疾病发生合并感染，多发于3-12周龄断奶后的仔猪。这种细菌也从越来越多的哺乳动物（包括人类）及鸟类中分离到，危急到人类的公共卫生安全。本病的病原体为多种溶血性链球菌，该菌为革兰氏阳性球菌，根据血清学反应，可分为20个血清群，较重要的有A、B、C、D、E、F、L、R等血清群，其中R、F群既可引起猪发病，也可导致人发病，近年来国内外已发生了数起R群的猪链球菌2型感染人的事件。猪链球菌按其荚膜抗原的差异，可分为35个血清型（1-34及1／2），猪链球菌2型是其中致病力最强、最常见的一种；此外，猪链球菌1型、7型及9型也可致猪病。对该菌的致病因子及其之间的相互作用机理尚不清楚。本实验就近几年从各邻近省市采集的猪的病料中，对分离的链球菌的流行情况进行分析研究，同时寻找快速、安全、有效的治疗和控制方法，主要开展了以下工作：1．2003年—2007年期间，分别从湖北、湖南、江西、河南、安徽等19个省市收集的病猪及病料中，共分离到链球菌472株。2．采用进口兰氏分群试剂盒A-G群，对472株链球菌进行分群鉴定，由实验结果可知湖北、湖南、江西、河南、安徽等19个省市的链球菌病的血清群分布情况如下：D群占258/472（54.5％）；G群占51/472（10.8％）；D/F群25/472（5.29％）；F群占25/472（5.29％）；C群占4/472（0.84％）；B群占3/472（0.63％）；D/G群占3/472（0.63％）；未能用该试剂盒分群的占103/472（21.8％）。3．同时合成一对谷氨酸脱氢酶（gdh）引物，运用聚合酶链反应（PCR）方法扩增，筛选出猪链球菌260株（占链球菌的55.1％）。4．根据相关资料合成主要毒力因子：荚膜多糖（cps）、溶菌酶释放蛋白（mrp）、细胞外蛋白因子（ef）及溶血素（sly）4对引物对已鉴定的猪链球菌，进一步运用PCR方法鉴定。猪链球菌2型的有101株（占猪链球菌的38.8％），其中已鉴定了77株猪链球菌2型毒力因子的分布为ef+/sly+/mrp+有44株（占57.1％），ef-/sly-/mrp-有9株（占11.7％），ef-/sly-/mrp+有15株（占19.5％），ef-/sly+/mrp+有3株（占3.9％），ef+/sly-/mrp-有1株（占1.3％），ef+/sly-/mrp+有2株（占2.6％），ef-/sly+/mrp-有3株（占3.9％）。5．对PCR鉴定为猪链球菌2型的菌株，进行葡萄糖、核糖、甘露醇、甘露糖、山梨醇、乳糖、棉子糖、阿拉伯糖、七叶苷、马尿酸盐、淀粉、精氨酸、MR、VP的生化实验。结果发现猪链球菌2型的生化特性差异太大，对糖的发酵不活泼，也不稳定，难于作为分类依据。6．在2006年7、8月部分省市猪群发病高峰期间，分离并鉴定的优势血清群菌株，并制备成自家苗在三处鉴定为猪链球菌病发生养殖户及地区使用，结合高免血清治疗，能很好的控制疾病的蔓延。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词（Abbreviation）
• 第一章 文献综述
• 1.1 病原
• 1.1.1 发现历史
• 1.1.2 病原特征
• 1.1.3 链球菌的生化特征
• 1.2 流行病学及其发病机理
• 1.3 临床症状
• 1.3.1 急性败血症
• 1.3.2 脑膜炎型
• 1.3.3 关节炎型
• 1.3.4 淋巴结脓肿型
• 1.4 病理变化
• 1.5 血清学鉴定
• 1.5.1 协同凝集试验（应用最广泛）
• 1.5.2 平板凝集试验
• 1.5.3 免疫印迹分析
• 1.5.4 酶联免疫吸附法（ELISA）
• 1.5.5 多克隆抗体的间接免疫荧光法和过氧化物酶-抗过氧化物酶
• 1.6 分子鉴定
• 1.6.1 多位点酶电泳法（MEE）
• 1.6.2 脉冲场凝胶电泳法（PFGE）
• 1.6.3 限制性片段长度多态性分析（RFLP）
• 1.6.4 随机扩增核酸片段多态性分析（RAPD）
• 1.6.5 PCR法
• 1.6.6 其它
• 1.7 预防与控制
• 1.7.1 加强消毒，净化环境
• 1.7.2 采取药物保健
• 1.7.3 加强饲养管理
• 1.7.4 宣传教育的普及
• 1.7.5 自家苗的应用
• 第二章 病原流行病学
• 2.1 研究目的和意义
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 猪链球菌病的临床症状
• 2.3.2 细菌的分离鉴定
• 2.3.3 兰氏分群结果
• 2.3.4 链球菌的PCR分型和毒素检测结果
• 2.3.5 猪链球菌2型的生长特性及生化结果
• 2.4 讨论
• 2.4.1 临床症状的多样性
• 2.4.2 细菌的分离鉴定结果分析
• 2.4.3 乳胶凝集、PCR结果分析
• 2.4.4 毒力因子扩增结果分析
• 2.4.5 生化试验结果分析
• 2.4.6 菌种资源的保存
• 第三章 自家苗在猪链球菌病中的应用
• 3.1 研究目的和意义
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 材料
• 3.2.2 方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 细菌鉴定结果
• 3.3.2 患猪链球菌病的猪场使用自家苗的控制情况
• 3.4 讨论
• 第四章 小结
• 参考文献
• 致谢