西多福韦对人乳头瘤病毒感染的宫颈癌细胞生长抑制作用的研究

论文摘要

目的研究我国宫颈癌（cervical carcinoma,CC）及癌前病变中人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）感染的现状及其型别特征;探讨西多福韦（Cidofovir,CDV）对HPV感染的宫颈癌Hela细胞和Siha细胞增殖生长的抑制作用,以评价西多福韦抗HPV感染和抗肿瘤的应用价值。方法1.临床研究:①回顾性分析690例患者的HPV检测、宫颈细胞学及阴道镜下宫颈组织病理学检查结果。其中,细胞学检查应用TCT法（Thinprepcytology test）,高危型HPV检测应用第二代杂交捕获实验（Hybrid CaptureⅡ,HCⅡ）。②回顾性分析153例宫颈癌及癌前病变的石蜡包埋组织标本,提取组织中DNA,应用基因芯片技术检测HPV亚型。2.体外研究:①应用MTT比色法和集落形成试验,测定西多福韦作用前后Hela细胞和Siha细胞的活性;②应用实时定量PCR法,观察西多福韦对Hela细胞中HPv18 E6、E7 mRNA和Siha细胞中HPV16 E6、E7 mRNA表达的影响;③应用Western-blot法,观察西多福韦用药前后Hela细胞和Siha细胞中p53、Rb等抑癌基因的表达;④应用流式细胞仪,检测西多福韦对Hela细胞和Siha细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响;⑤应用TRAP-ELISA法,检测西多福韦用药前后Hela细胞和Siha细胞端粒酶的活性。3.体内研究:应用Hela细胞和Siha细胞分别建立裸鼠人宫颈癌模型（2×106个细胞/只）。肿瘤形成后,随机将裸鼠各分为3组,分别在瘤内注射PBS、2.5mg/ml西多福韦（0.25mg/次）和5.0mg/ml西多福韦（0.5mg/次）,3次/周,共3周。①通过比较肿瘤体积和重量,观察西多福韦对裸鼠肿瘤生长的抑制作用:②应用Western-blot法,观察西多福韦用药前后肿瘤中p53蛋白的表达:③应用免疫组织化学法检测各组肿瘤切片中PCNA抗原的表达,同时应用TUNEL技术检测西多福韦对细胞凋亡的影响。结果1.临床研究:①宫颈上皮内瘤样病变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）Ⅱ/Ⅲ和浸润癌患者的高危型HPV阳性率均在90.00%以上,且细胞学、病理学级别越高,高危型HPV感染率越高;②HPV负荷量越高,宫颈病变程度越严重;③宫颈病变程度不同,其感染的HPV亚型亦有所不同,其中HPV16是主要的致病亚型;④HPV混合感染率随着宫颈病变病理学级别的增高而增加。2.体外研究:①MTT比色法和集落形成试验结果显示,西多福韦能明显抑制Hela细胞和Siha细胞的增殖活性,与对照组比较有显著性差异（P<0.05）;②实时定量PCR结果证实,西多福韦能明显降低Hela细胞中HPV18 E6、E7和Siha细胞中HPV16 E6、E7 mRNA的表达:③西多福韦可使Hela细胞和Siha细胞中p53蛋白的表达增高,且具有剂量依赖关系,还可使细胞中非磷酸化Rb蛋白产物增加,磷酸化Rb蛋白产物降低;④西多福韦能使Hela细胞和Siha细胞阻滞于细胞周期的S期和G1期;⑤与对照组比较,西多福韦能明显抑制Hela细胞和Siha细胞的端粒酶活性（P<0.01）。3.体内研究:①西多福韦能明显抑制接种了Hela细胞和Siha细胞的裸鼠肿瘤的体积和重量,与对照组比较有显著性差异（P<0.01）;②Western-blot结果显示,西多福韦能增加裸鼠肿瘤中p53蛋白的表达;③西多福韦还可使肿瘤中PCNA的表达降低,诱导肿瘤细胞凋亡。结论高危型HPV感染是宫颈癌的根本致病因素,清除HPV感染是预防宫颈癌发生的关键。西多福韦对HPV感染的宫颈癌Hela细胞和Siha细胞及其荷瘤裸鼠肿瘤的增殖生长具有明显的抑制作用,并能诱导细胞凋亡。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 HPV感染的现状及其型别特征的研究
• 实验目的
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分 西多福韦对Hela细胞、Siha细胞生长抑制作用的体外实验
• 实验目的
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第三部分 西多福韦对Hela细胞、Siha细胞生长抑制作用的体内实验
• 实验目的
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 攻读学位期间发表文章和参加会议情况
• 致谢