芦荟次生代谢物质离体培养技术的研究

论文摘要

珍贵药用植物芦荟,含有以蒽醌类物质为主的次生代谢物质,具有极高的医疗、美容和保健价值。以芦荟为材料生产次生代谢物质具有广阔的开发前景。本文利用植物细胞组织培养技术,对库拉索芦荟的离体快繁培养、愈伤组织和悬浮细胞培养及葸醌类物质的含量和分步规律做了初步的研究,为大规模蒽醌类次生代谢物质离体培养提供依据。 外植体消毒以含有效氯1.5%的次氯酸钠溶液消毒15min（外植体长度<2cm）和含有效氯2%的次氯酸钠溶液消毒20min（外植体长度>2cm）的效果较好,成活率分别为84%和95%。增殖过程中BAP起主要作用。IBA的生根效果比NAA好,移栽后5个月成活率为90%。愈伤组织诱导的最佳外植体为2cm左右的茎段和茎尖,最佳培养基为ER+NAA15mg/L+2,4-D4.0mg/L+KT0.1mg/L+Sugar 30g/L（pH值为5.8、暗培养）,出愈率最高为92.48%,添加Vc（5mg/L）能在一定程度上减轻褐化,添加AgNO3（10mg/L）作用较大,能增大愈伤组织的生长量并改善愈伤组织生长状态,25d达到最大生物量20.8 mg/LDW;悬浮细胞生长的最佳培养基为ER+NAA 2.00 mg/L+KT 0.02 mg/L+Sugar45 g/L（pH值为5.8、暗培养）,12d达到最大生物量22.83 mg/LDW。愈伤组织中蒽醌含量为0.134 mg/gFW,悬浮细胞中葸醌含量较高,接近叶片中的葸醌含量,为0.201 mg/gFW。蒽醌含量的积累期主要是在愈伤组织和悬浮细胞的生长平稳期和静止期。利用石蜡切片和组织化学定位相结合的方法对蒽醌类物质在库拉索芦荟叶片及愈伤组织中分布定位的研究结果表明,叶片中葸醌类次生代谢物质主要分布在同化薄壁组织中的芦荟素细胞及其胞间隙中,储水组织中没有蒽醌类物质的分布,愈伤组织中主要分布在少数大型薄壁细胞中。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词
• 目录
• 1 引言
• 1.1 芦荟的研究开发与应用现状
• 1.1.1 芦荟的活性成分及其疗效
• 1.1.1.1 蒽醌类物质
• 1.1.1.2 多糖类物质
• 1.1.1.3 其它成分
• 1.1.2 蒽醌类成分的研究近况
• 1.1.2.1 蒽醌类物质在芦荟叶内的分布及组织化学定位
• 1.1.2.2 蒽醌类物质含量的测定方法
• 1.1.3.芦荟应用市场与前景
• 1.2 植物细胞组织培养获得次生代谢物质的研究进展
• 1.2.1 植物细胞培养技术的研究进展
• 1.2.2 植物细胞培养技术及其特点
• 1.2.2.1 植物细胞培养方法
• 1.2.2.2 植物细胞培养的特点
• 1.2.3 植物细胞培养中影响次生代谢物质积累的因素
• 1.2.4 解决对策
• 1.2.4.1 筛选细胞系和优化培养条件
• 1.2.4.2 增加前体和诱导子
• 1.2.4.3 两相培养
• 1.2.4.4 毛状根培养和冠瘿瘤培养
• 1.3 本论文的研究目的和意义
• 2 芦荟离体快繁的研究
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.2.1 外植体的表面消毒
• 2.2.2 增殖培养
• 2.2.3 生根培养
• 2.2.4 炼苗和移栽
• 2.2.5 培养条件
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 消毒剂浓度和时间的选择
• 2.3.2 增殖培养
• 2.3.3 生根培养
• 2.3.4 炼苗和移栽
• 2.4 小结
• 3 愈伤组织及悬浮细胞培养
• 3.1 库拉索芦荟愈伤组织诱导条件的筛选
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.1.2.1激素配比
• 3.1.2.2 外植体不同种类、大小及接种方式
• 3.1.2.3 基本培养基及糖含量
• 3、Vc和CH'>3.1.2.4 附加物AgNO₃、Vc和CH
• 3.1.2.5 培养条件
• 3.1.3 结果与分析
• 3.1.3.1 生长素对芦荟愈伤组织诱导和生长的影响
• 3.1.3.2 细胞分裂素对愈伤组织诱导的影响
• 3.1.3.3 生长素和细胞分裂素交互作用对愈伤组织诱导和生长的影响
• 3.1.3.4 外植体不同种类、大小及接种方式对愈伤组织诱导及生长的影响
• 3.1.3.5 基本培养基及糖含量对愈伤组织诱导及生长的影响
• 3和Vc对愈伤组织诱导及生长的影响'>3.1.3.6 附加物AgNO₃和Vc对愈伤组织诱导及生长的影响
• 3.2 木立芦荟和不夜城芦荟愈伤组织诱导条件的筛选
• 3.2.1 材料
• 3.2.2.1 激素种类和用量的筛选
• 3.2.2.2 外植体种类和接种方式的筛选
• 3.2.2.3 培养条件
• 3.2.3 结果与分析
• 3.2.3.1 激素种类和用量的筛选
• 3.2.3.2 外植体种类和接种方式的筛选
• 3.3 芦荟愈伤组织生长条件的优化
• 3.3.1 材料与方法
• 3.3.1.1 激素配比
• 3.3.2 结果与分析
• 3.3.2.1 激素配比对愈伤组织生长条件的优化
• 3.4 细胞悬浮培养
• 3.4.1 材料
• 3.4.2 方法
• 3.4.2.1 基本培养基、糖含量及接种量
• 3.4.3 结果与分析
• 3.4.3.1 基本培养基、糖含量和接种量对细胞生长的影响
• 3.4.3.2 激素配比对细胞生长的影响
• 3.4.3.4 细胞生长周期
• 3.5 小结
• 3.5.1 库拉索芦荟
• 3.5.2 木立芦荟和不夜城芦荟
• 4 蒽醌含量的测定及其组织化学定位
• 4.1 蒽醌含量的测定
• 4.1.1 材料与方法
• 4.1.1.2.1 蒽醌含量的测定方法
• 4.1.2 结果与分析
• 4.1.2.1 蒽醌含量的比较
• 4.1.2.2 愈伤组织生长周期中蒽醌含量积累的变化
• 4.1.2.3 细胞生长周期中蒽醌含量积累的变化
• 4.2 蒽醌组织化学定位
• 4.2.1 材料与方法
• 4.2.1.1 材料
• 4.2.1.2 方法
• 4.2.2 结果与分析
• 4.3 小结
• 5 讨论与结论
• 5.1 结论
• 5.2 讨论
• 参考文献
• 图版
• 导师简介
• 个人简介
• 致谢