p53非依赖性信号通路在MMS致细胞凋亡中的机制研究

论文摘要

MMS,又名甲磺酸甲酯,是一种典型的甲基化试剂。MMS作为重要的治疗癌症的化疗药物,能够导致细胞发生DNA双链断裂(DSB)。DNA双链断裂的形成是许多抗癌药物发挥药效的重要标志。目前众多研究证明,MMS能够诱导不同细胞株中p53依赖性信号通路介导的细胞凋亡的发生。然而,当p53基因敲除时,细胞仍然表现出对MMS药物相似的敏感性,从而证明在诱导细胞凋亡过程中p53非依赖性信号通路的存在。为了进一步研究MMS诱导的细胞凋亡中p53非依赖性信号通路的具体机制,本实验建立了MMS诱导细胞凋亡的实验模型。实验选取了2种细胞株,分别为p53基因缺失的H1299细胞和Hep3B细胞。并确定了MMS染毒的5种浓度,分别为50μM、100μM、200μM、400μM和800gM。实验结果证明,在MMS染毒时间为12h,染毒浓度为50μM、100μM、200μM、400μM和800μM时,两种细胞株中均出现γH2AX焦点,即细胞发生不同程度的DNA损伤。在MMS染毒时间为12h,染毒浓度为400μM和800gM时,两种细胞株均发生细胞凋亡。这一细胞凋亡的过程涉及到线粒体膜通透性的降低,Caspase2蛋白从细胞核到细胞质的转移,细胞色素C的释放,以及Caspase9的剪切激活等。然而,MMS诱导的细胞凋亡不能够激活p53家族成员TAp73以及DNp73的参与。综上所述,MMS诱导的这两种细胞凋亡为p53非依赖性以及p73非依赖性的信号通路介导的,而凋亡的发生与Caspase2从细胞核到细胞质的转移激活及线粒体通路有关。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 缩略语
• 目次
• 1 引言
• 2 实验材料
• 2.1 实验细胞系
• 2.2 实验器材
• 2.3 实验试剂
• 2.4 试剂配制
• 3 实验方法
• 3.1 细胞培养
• 3.2 细胞染毒处理
• 3.3 细胞活力的检测
• 3.4 细胞DNA损伤程度的检测
• 3.5 细胞周期的检测
• 3.7 线粒体膜电位的检测
• 3.8 蛋白样品的制备
• 3.9 蛋白样品的定量
• 3.10 Western blotting方法
• 4 实验结果
• 4.1 MMS对细胞活力的影响
• 4.2 MMS对细胞凋亡与坏死的影响
• 4.3 MMS对细胞DNA损伤程度的影响
• 4.4 MMS对细胞线粒体膜通透性的影响
• 4.5 MMS对细胞凋亡发生相关蛋白表达的影响
• 5 讨论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 作者简历及在读期间所取得的科研成果