Wnt通路相关基因在AFB1诱导大鼠肝癌及人肝细胞癌发生发展中的作用

论文摘要

研究背景和目的肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是世界范围内发病率第五，死亡率第三的癌症，严重危害着健康，每年约有一百万人死于HCC。在我国，HCC死亡率占全部恶性肿瘤死亡的18.8％，在广西居恶性肿瘤死亡率第一位。 HCC发生的分子机制一直不很清楚，目前对HCC的研究主要集中在肿瘤相关基因的克隆、细胞信号转导通路和细胞周期调控等三个方面。Wnt信号转导通路是指由Wnt基因调控的信号转导系统，是近年肿瘤病因学研究的一个新热点。许多研究表明，Wnt信号通路参与细胞的增殖和分化，与细胞正常发育密切相关；Wnt信号通路如果被异常激活，还与肝癌、结肠癌、肺癌、肾癌等肿瘤的发生发展密切相关。本研究对黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发大鼠肝癌发生过程中定期采集的肝活检组织，动态观察Wnt信号通路相关基因β-Catenin、GSK-3β以及C-myc、Cyclin D1的变化情况，同时以广西南部地区人HCC、癌旁组织及正常肝组织标本做对比，探讨在肝癌形成过程中Wnt信号转导通路与其靶基因C-myc和Cyclin D1的关系，以及它们在肝癌发生发展过程中的作用。方法 80雄性SD大鼠适应环境后随机分组，AFB1组66只，腹腔注射AFB1至第32W；正常对照组14只，不给予AFB1，同法喂养至58W实验结束。分别在实验第12、20、36、46对全部动物进行肝活检，58W处死全部动物，取

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主要英文缩略语

摘要

ABSTARCT

前言

一、HCC发生的主要因素

二、Wnt信号转导通路与肿瘤的关系

（一） Wnt信号转导通路的来历

（二） Wnt信号转导通路的主要组成及其与肿瘤的关系

三、Wnt信号转导通路的靶基因

四、本研究的目的及主要内容

1.材料与方法

1.1 标本来源

1.2 主要试剂

1.3 主要设备

1.4 实验方法

1.4.1 AFB1诱发大鼠HCC实验

1.4.2 分子生物学实验准备

1.4.2.1 器具的消毒灭菌

1.4.2.2 试剂配制

1.4.3 分子生物学实验方法

1.4.3.1 提取组织DNA

1.4.3.2 PCR扩增反应

1.4.3.3 提取组织总RNA

1.4.3.4 总RNA逆转录成cDNA

1.4.3.5 RT-PCR扩增反应

1.4.3.6 Western Blot检测

1.4.4 免疫组织化学染色

1.5 统计学处理

2.结果

2.1 大鼠肿瘤发生情况

2.2 肝组织标本总RNA的质量鉴定结果

2.3 β-catenin基因突变及表达情况

2.3.1 大鼠肝组织CTTNB1突变的分析

2.3.2 人肝组织CTTNB1突变的分析

2.3.3 β-catenin mRNA在大鼠HCC发生过程中的表达情况

2.3.4 β-Catenin mRNA在人肝组织的表达情况

2.3.5 β-Catenin蛋白在肝组织中的表达情况

2.3.5.1 β-Catenin蛋白的细胞定位

2.3.5.2 β-Catenin蛋白在大鼠HCC发生过程中表达情况

2.3.5.3 人HCC组织中β-Catenin蛋白表达情况

2.3.5.4 Western Blot对β-Catenin蛋白表达的分析验证

2.4 GSK-3β表达情况

2.4.1 GSK-3β mRNA在大鼠HCC发生过程中的表达情况

2.4.2 GSK-3β mRNA在人肝组织的表达情况

2.4.3 GSK-3β蛋白在肝组织中的表达情况

2.5 C-myc的表达情况

2.5.1 C-myc mRNA在大鼠HCC发生过程中的表达情况

2.5.2 C-myc mRNA在人肝组织中的表达情况

2.5.3 C-myc蛋白在肝组织中的表达情况

2.6 Cyclin D1的表达情况

2.6.1 Cyclin D1 mRNA在人鼠HCC发生过程中的表达情况

2.6.2 Cyclin D1 mRNA在人肝组织中的表达情况

2.6.3 Cyclin D1蛋白在肝组织中的表达情况

2.7 β-Catenin、GSK-3β、C-myc和Cyclin D1之间的相关性分析

3.讨论

一、AFB1诱发大鼠HCC及其与Wnt通路的关系

二、β-Catenin在HCC发生发展中的意义

三、GSK-3β在HCC发生发展中的意义

四、C-myc在HCC发生发展中意义

五、Cyclin D1在HCC发生发展中的意义

六、β-Catenin与C-myc、Cyclin D1、GSK-3β的相关性

4.小结

5.创新点

附图

参考文献

Wnt通路相关基因在AFB1诱导大鼠肝癌及人肝细胞癌发生发展中的作用

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