论文摘要
目的探讨尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡Fas/FasL及Caspase信号途径的影响。方法取对数生长期HL-60细胞,分为：对照组（未加任何药物的HL-60细胞）,NMDP（0.001g/L～0.100g/L）组,Ara-c（0.005g/L～0.500g/L）组,NMDP+Ara-c组,处理HL-60细胞24h。采用ATP化学发光法检测细胞增殖抑制率,选取NMDP浓度为0.050g/L、Ara-c浓度为0.010g/L为最适浓度,后分为：对照组（未加任何药物的HL-60细胞）,NMDP组（浓度为0.050g/L）, Ara-c组（浓度为0.010g/L）,NMDP（0.050g/L）+Ara-c（0.010g/L）组。吖啶橙/溴化乙锭（A0/EB）染色、荧光显微镜下观察细胞凋亡形态,且计数凋亡细胞,计算凋亡率。Western blotting方法检测细胞Fas及FasL蛋白的表达。Caspase3和Caspase8试剂盒检测Caspase3及Caspase8活性。结果1.细胞增殖抑制率：①与对照组比较,不同浓度NMDP （0.001～0.100g/L）组及Ara-c（0.005、0.500g/L）组细胞增殖抑制率差异均有显著性（FNMDP）=12231.563,FAra-c=6404.210,p=0.000)。②当NMDP浓度为0.050g/L、Ara-c浓度为0.010g/L时,细胞增殖抑制率最高,差异有极显著性（F=916.836,p=0.000）。2.细胞凋亡：①A0/EB染色：对照组细胞多呈均一绿色且细胞形态完整,NMDP组、Ara-c组及NMDP+Ara-c组均可见数量不等的核染色质呈橘红色、固缩状晚期凋亡细胞,且以NMDP+Ara-c组最多。②细胞凋亡率：对照组凋亡率为（5.021±0.391）%,NMDP组、Ara-c组及NMDP+Ara-c组分别为（14.203±1.204）%,（27.604±3.192）%,（54.929±11.598）%,均明显高于对照组（F=148.020,p=0.000）；Ara-c组凋亡率高于NMDP组（p<0.05）,但低于NMDP+Ara-c组。3.Fas蛋白表达：对照组Fas蛋白表达灰度扫描比值为（0.642±0.008）,NMDP组、Ara-c组与NMDP+Ara-c组分别为（0.677±0.003）,（0.716±0.005）,（0.939±0.003）,与对照组相比,三组均有统计学差异（F=1890.569,p=0.000）；Ara-c组Fas蛋白表达高于NMDP组（p=0.000）,但低于NMDP+Ara-c组。4. FasL蛋白表达对照组FasL蛋白表达灰度扫描比值为（0.493±0.001）, NMDP组、Ara-c组与NMDP+Ara-c组分别为（0.554±0.007）,（0.605±0.001）,（0.807±0.003）,明显高于对照组（F=16065.218,p=0.000）,且三组间相比亦有统计学差异（p=0.000）,以NMDP+Ara-c组升高最显著。5.Caspase3活性：对照组Caspase3活性为（116699.000±72834.647）RLU, NMDP组、Ara-c组及NMDP+Ara-c组分别为（234964.333±32328.981）RLU,（614644.333±15958.413）RLU,（815261.000±91330.007）RLU,与对照组相比,三组均有统计学差异（F=85.045,p=0.000）；Ara-c组Caspase3活性高于NMDP组（p<0.05）,但低于NMDP+Ara-c组。6. Caspase8活性：对照组Caspase8活性为（5890.500±1523.108） RLU, NMDP组、Ara-c组及NMDP+Ara-c组细胞分别为（16135.000±140.714） RLU,（39399.000±1786.859）RLU,（66113.000±823.779）RLU,明显高于对照组（F=923.843,p=0.000）：Ara-c组Caspase8活性高于NMDP组（p<0.05）,而低于NMDP+Ara-c组。7.细胞凋亡与Fas/FasL蛋白表达：①Fas蛋白表达与细胞凋亡：Pearson相关系数为0.893,p=0.000,差别有显著性,Fas蛋白表达与凋亡呈强正线性相关。②FasL蛋白表达与细胞凋亡：Pearson相关系数为0.939,p=0.000,差别有显著性,FasL蛋白表达与凋亡呈强正线性相关。③Fas与FasL蛋白表达：Pearson相关系数为0.992,p=0.000,差别有显著性,Fas与FasL蛋白表达呈强正线性相关。8.细胞凋亡与Caspase活性：①Caspase3与细胞凋亡：Pearson相关系数为0.967,p=0.000,差别有显著性,Caspase3活性与凋亡呈强正线性相关。②Caspase8与细胞凋亡：Pearson相关系数为0.981,p=0.000,差别有显著性,Caspase8活性与凋亡呈强正线性相关。③Caspase3与Caspase8:Pearson相关系数为0.960,p=0.000,差别有显著性,Caspase3与Caspase8活性呈强正线性相关。9. Fas/FasL蛋白表达与Caspase活性：①Fas与Caspase3:Pearson相关系数为0.865,p=0.000,差别有显著性,Fas蛋白表达与Caspase3活性呈强正线性相关。②Fas与Caspase8:Pearson相关系数为0.942,p=0.000,差别有显著性,Fas蛋白表达与Caspase8活性呈强正线性相关。③FasL与Caspase3:Pearson相关系数为0.905,p=0.000,差别有显著性,FasL蛋白表达与Caspase3活性呈强正线性相关。④FasL与Caspase8:Pearson目关系数为0.971,p=0.000,差别有显著性,FasL蛋白表达与Caspase8活性呈强正线性相关。结论1.尼莫地平能协同阿糖胞昔促进HL-60细胞增殖抑制,NMDP（0.001～0.050g/L）及Ara-c（0.005～0.010g/L）范围内均呈浓度依赖性。当NMDP浓度为0.050g/L、Ara-c浓度为0.010g/L时,细胞增殖抑制率最高。2.尼莫地平能协同阿糖胞苷增强HL-60细胞Fas和FasL蛋白表达,Fas及FasL蛋白表达与细胞凋亡呈强正线性相关,提示其凋亡机制可能与上调Fas与FasL蛋白表达有关。3.尼莫地平能协同阿糖胞苷增强HL-60细胞Caspase3和Caspase8活性,Caspase3及Caspase8活性与细胞凋亡呈强正线性相关,提示其凋亡机制可能与增强Caspase3及Caspase8活性有关。4、Fas及FasL蛋白表达与Caspase3及Caspase8活性亦呈强正线性相关,提不Fas/FasL蛋白参与尼莫地平协同阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡可能是通过Caspase途径完成的。
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