论文摘要
恶性肿瘤已成为全世界死亡的一个主要原因。目前已有的抗肿瘤药物存在着药效高但毒副作用大、选择性差等问题。因此，从不同途径寻找低毒、高效、特异的抗肿瘤药物乃是目前肿瘤药物治疗的当务之急。而肽类药物凭借着结构相对简单、功能较明确、特异、副作用小等优势，正成为该领域研究的热点。本论文以一利用生物信息学软件筛选的生物活性肽LH-7为研究对象。通过体外细胞试验和增强免疫功能试验综合评价了其抗肿瘤活性，并初步探讨了其抑瘤生长机理，为其作为抗肿瘤新药的研发奠定了理论基础，主要研究包括：采用MTT法分析了LH-7对肝癌细胞系HepG2的抑制效果：当LH-7浓度在0.01-1.0μmol/L范围内，其抑制率呈浓度依赖性；尤其是浓度为1.0μmol/L的LH-7抑制效果较好可达32.03%。进一步采用改良的MTT法检测其对白血病细胞HL-60的作用效果：在0.1-10μmol/L浓度范围内和0-72h作用时间内对HL-60抑制作用是呈剂量依赖性和时间依赖性；LH-7作用于HL-60细胞48h的IC50为15.4μmol/L，72h时IC50为8.8μmol/L。利用透射电镜和流式细胞仪检测方法初步推断LH-7对HL-60作用的机理可能是通过诱导细胞凋亡来实现的。由于免疫调节也在抑制肿瘤的过程中发挥着及其重要的作用，本研究通过小鼠增强免疫功能试验，结果表明：LH-7可明显促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖，同时提高NK细胞活力，由此初步推断LH-7可提高小鼠的免疫功能。这暗示了LH-7的抗肿瘤机理也可能是通过刺激免疫细胞活性，保护免疫器官，起到间接抗肿瘤的作用。从脏器的解剖情况和小鼠灌胃过程中的情况观察，LH-7对小鼠无明显的药物毒性作用，服用相对安全，为抗肿瘤免疫肽的药物实现奠定基础。对LH-7稳定性的研究中发现：LH-7为固体粉末态状态下稳定性良好，4℃避光条件下可长时间保存6个月之久仍未降解；而在液体状态下温度和反复冻融对其稳定性的影响很大。考虑到多肽产品的多样性以及功能性食品的可实现性，本研究还以酶解动物源血清的方式获得具有抗肿瘤活性的混合多肽。若继续进行分离纯化，有望最终获得LH-7或者和LH-7具有类似活性的多肽。