小蓟中有效成分的提取及含量测定方法

小蓟中有效成分的提取及含量测定方法

惠秋沙(山东中医药大学山东济南250014)

【摘要】小蓟中有效成分比较复杂,药理作用和临床应用广泛,现针对小蓟中有效成分的提取及含量测定方法作一综述。

【关键词】小蓟有效成分提取含量测定

小蓟为菊科植物刺儿菜Cephalanoplossegetum(Bunge)Kitam.的地上部分。夏、秋二季花开时采割,除去杂质,晒干。小蓟有抗菌、抗肿瘤、凉血止血、清热消肿、升血压等作用。小蓟有效成分比较复杂,主要含生物碱、黄酮、三萜以及简单酚酸,带花全草含芸香甙、原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、氯化钾、蒙花甙、刺槐素、酪桉、蒲公英甾醇、φ-蒲公英甾醇乙酸酯,薄公英甾醇,φ-蒲公英甾醇乙酸酯,三十烷醇,β-谷甾醇、豆甾醇[1,2]。其中止血活性成分有刺槐素-7-鼠李糖苷、芸香苷、咖啡酸、绿原酸、原儿茶醛以及蒲公英甾醇等。现针对小蓟中现代成分的提取及含量测定方法作一综述。

1小蓟的主要化学成分[3]

1.1有机酸原儿茶酸、咖啡酸、绿原酸等。

1.2三萜类化合物B2谷甾醇、豆甾醇、伪-乙酰蒲公英甾醇、蒲公英甾醇等。

1.3黄酮类芦丁、刺槐素、蒙花苷等。

1.4其他成分酪胺、三十二烷醇、氯化钾等等。

2小蓟有效成分的提取

2.1索氏提取法[4]

索氏提取法也是大蓟中黄酮类成分的提取方法之一,精密称取适量药材粉末,置索氏提取器中,加石油醚,回流脱脂,取出过夜晾干。再用95%的乙醇在索氏提取器提取,处理提取液即可。小蓟中总黄酮类成分可用大孔吸附树脂分离纯化[5]。

2.2热回流提取法

精密称取药材粉末适量,分别置索氏提取器中,加石油醚,回流脱脂,取出过夜晾干。置烧瓶中,用95%的乙醇热回流提,抽滤,洗涤,合并滤液即得提取液。水回流提取小蓟中咖啡酸酯类成分,再用大孔吸附树脂对小蓟提取物进行吸附纯化[6]。

2.3乙醇超声提取法

超声提取可以破坏细胞壁,有助于黄酮类化合物的释放与溶出,效率较高。精密称取适量药材粉末,加95%乙醇定容。直接超声处理或浸泡24h后超声处理后,加95%乙醇定容。摇匀,抽滤,取续滤液即可。陈毓、丁安伟采取超声提取法提取小蓟中的绿原酸[7]。小蓟中蒙花苷提取方法有甲醇超声提取法、甲醇索氏提取法、甲醇热回流提取法,经比较得出,甲醇超声提取完全,简单易行[8]。张斌慧采用正交试验法以分光光度法测定提取物中芦丁的含量,优化了小蓟中芦丁的提取工艺[9]。

3小蓟有效成分的含量测定

3.1高效液相色谱法

高效液相色谱法是小蓟中现代成分含量测定的常用方法。陈毓、丁安伟采用HPLC法测定小蓟中绿原酸的含量[7]。色谱条件:LichrospherC18色谱柱(200mm×4.6mm,5um),柱温:30℃,以甲醇-1%醋酸(15:85)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长327nm。绿原酸在0.00328-0.02952ug/ul范围内具有良好的线性关系。经过系统的方法学考察,该方法具有稳定、重复性较好、简便快速、结果准确可靠等特点。

侯坤、许浚、张铁军建立了HPLC法测定小蓟中蒙花苷的含量[8],采用DiamonsilC18(4.6mm×200mm,5μm)为色谱柱;以甲醇为流动相A,以水(含1%冰乙酸)为流动相B,梯度洗脱;流速1.0mL/min;柱温35℃;进样量20μL;检测波长为327nm。蒙花苷的浓度0.018~0.18g/L范围内与峰面积成良好的线性关系,该法简便,快捷,结果准确、重复性好。

高效液相色谱法是小蓟中芦丁成分比较成熟的含量测定方法。杨瑞瑞,陈毓,张丽,丁安伟等都曾采用[10,11,12]。

3.2原子吸收光谱法

王乃兴等用原子吸收光谱法测定了小蓟的不同部位(花、叶、茎、根)中的宏量元素(Ca、Mg、K)和微量元素(Cu、Zn、Mn、Cr、Co、Ni、Fe、Pb、Na)。结果表明,人体中必需的微量元素Zn、Fe、Mn、Cu等在小蓟中的含量均较高[13],此法利于更科学的使用和挖掘小蓟药物使用价值。高俊、张菊平等采用火焰原子吸收光谱法对小蓟不同部位中Cu、Zn、Fe、Mg、Mn、Ca等6种微量元素的含量进行测定,为小蓟的进一步开发利用和临床指导提供了依据[14]。

3.3分光光度法

用紫外分光光度法对小蓟中咖啡酸酯类成分进行测定[6],测定波长为327nm。标准曲线显示,试样质量浓度在2.66~21.28uL/mL与吸光度呈良好的线性关系。周兰香、黄阿根、谢凯舟等曾采用分光光度法测定荷叶中的总黄酮[15]。理论上分光光度法也是小蓟中黄酮类成分的含量测定方法,陈毓等采用分光光度法测定小蓟及小蓟炭中总黄酮含量,在0.008~0.048mg/mL范围呈良好线性关系[16]。

3.4薄层扫描法

薄层扫描法也是小蓟中现代成分的含量测定方法之一,杨海燕、郭耀武、周文序等采用薄层扫描法对小蓟中的芦丁进行含量测定[17-18],此方法简便、快速、灵敏、准确。

3.5比色法

杨洋、余炼、邓立膏等采用比色法测定柚皮中黄酮的含量[19],理论上比色法也是小蓟中黄酮类成分的含量测定方法,但未见此类参考文献。周建青,徐爱列,王国锋采用酚类物质中酚羟基与三氯化铁的显色反应,进行绿原酸含量的比色测定[20]。

4小结

通过以上的文献检索以及所查资料了解到,小蓟有效成分的研究比较成熟,但有关小蓟的质量控制方面研究报道较少,目前主要参照《中华人民共和国药典》,测定蒙花苷的含量,其不得少于0.70%[21]。

参考文献

[1]孟永海等.小蓟化学成分研究[J].中药材,2009,32(1):58-61.

[2]潘珂,尹永芹,孔令义.小蓟化学成分的研究[J]中国现代中药,2006,8(4):7-9.

[3]倪晓霓.大蓟与小蓟的研究现状及展望[J].时珍国医国药,2005,16(6):548-549.

[4]倪晓霓,赵宏阳,杭太俊.大蓟、小蓟中黄酮类成分的不同提取方法及含量测定[J].江苏药学与临床研究,2005,13(1):33-35.

[5]杨星昊,刘海,丁安伟.大孔吸附树脂分离纯化小蓟总黄酮的研究[J].甘肃中医,2005,18(12):47-48.

[6]许浚等.大孔吸附树脂富集小蓟中咖啡酸酯类成分的研究[J].中草药,2005,36(6):846-848.

[7]陈毓,丁安伟.HPLC法测定小蓟中绿原酸的含量[J].天津中医药,2005,2(6):507-509.

[8]侯坤,许浚,张铁军.HPLC同时测定小蓟中蒙花苷和绿原酸的含量[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(3):62-64.

[9]张斌慧.小蓟中芦丁提取工艺的优化[J].中国药师,2006,9(2):190-191.

[10]陈毓.高效液相色谱法测定小蓟中芦丁含量[J].中国中医药信息杂,2007,14(12):45.

[11]陈毓,张丽,丁安伟.HPLC法测定小蓟中芦丁的含量.中华中医药学会第五届中药炮制学术会议论文集174-177.

[12]杨瑞瑞,郭耀武.HPLC法测定小蓟中芦丁的含量[J].现代中医药,2006,26(4):52-54.

[13]王乃兴等.小蓟的不同部位中12种金属元素含量分析测定[J].微量元素与健康研究,2008,25(3):24-25.

[14]高俊等.火焰原子吸收光谱法测定小蓟中6种微量元素[J].安徽农业科学,2009,37(18):8312-8313.

[15]周兰香等.分光光度法与HPLC法测定荷叶总黄酮的研究[J].中草药,2002,33(1):35-37.

[16]陈毓,饶玉鹏,李锋涛.分光光度法测定小蓟及其小蓟炭总黄酮含量[J].畜牧与饲料科学2010,(8).

[17]周文序,田珍.中药大蓟、小蓟中柳穿鱼苷和芦丁的薄层扫描法定量分析[J].药物分析杂志,1994,14(6):39240.

[18]杨海燕等.薄层扫描法测定小蓟中芦丁含量[J].西北药学杂志,1998,13(4):155.

[19]杨洋等.柚皮黄酮的提取工艺及含量测定[J].广西轻工业,2001.

[20]周建青,徐爱列,王国锋.不同测定方法测定小蓟中绿原酸含量的研究[J].安徽农业科学,2009,37(27).

[21]国家药典编委会.中华人民共和国药典[M].中国医药科技出版社,一部.

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