骨髓基质干细胞及地塞米松治疗大鼠脊髓挫伤的实验研究

论文摘要

目的：探讨骨髓基质干细胞对脊髓损伤修复的可能作用及其对bFGF的表达影响，为骨髓基质干细胞修复脊髓损伤提供实验依据。方法：采用改良的Allen氏WD法建立脊髓(T12节段)损伤模型，对66只SD大鼠，6只／组。随机分为正常组、损伤后未移植的对照组（术后1天组、3天组、7天组、14天组和21天组）和骨髓基质干细胞移植治疗组（1天组、3天组、7天组、14天组和21天组），通过BBB行为学评分比较两组动物后肢恢复功能，ABC免疫组织化学方法检测bFGF的表达。在荧光显微镜下观察细胞移植组荧光细胞生存情况。在Olympus光学显微镜下观察各组bFGF蛋白表达情况，HPLAS-1000高清晰图文分析系统，对bFGF免疫阳性反应物进行平均灰度测定。结果：1．移植细胞观察结果：在移植后1天、3天、7天、14天、21天均可见转绿色荧光蛋白的荧光细胞，荧光细胞呈小圆形亮点，1天组可见细胞聚集在损伤部位，成团状，很难分清单个细胞；3天组成团的细胞开始向周围扩散可见荧光细胞呈小圆形；7天组细胞清晰可数，在损伤中心分布均匀；14天组与7天组无明显的差异；21天组细胞分布更加均匀，细胞变得更圆，并向远处迁移。2．绿色荧光蛋白转基因小鼠MSCs移植治疗脊髓损伤后bFGF的表达变化：bFGF在各组大鼠脊髓灰质神经元胞质和胶质细胞中均呈阳性表达，损伤后对照组与骨髓基质干细胞移植组阳性细胞数总体出现先升高后降低的趋势，损伤后7d表达达高峰，21d接近正常组。损伤对照组3d、7d、14d组阳性细胞数均高于正常组（p＜0.05），1d和21d组接近正常组（p＞0.05）；细胞移植组在3d、7d、14d、21d组阳性细胞数均高于正常组（p＜0.05），1d组接近正常组（p＞0.05）；损伤对照组与损伤后细胞移植治疗组比较，阳性细胞数于3d、7d、14d、21d组出现差异（p＜0.05），余各组未见差异。其间可见细胞内bFGF阳性部位由以胞浆为主转向核、浆并现。平均狄度值检测结果显示：灰度值出现先降低后升高，7d最低；损伤对照组和细胞移植组均低于正常组（p＜0.05），细胞移植组在各时段均低于损伤对照组（p＜0.05）。3．行为学评分结果：损伤对照组及细胞移植治疗组BBB评分值在损伤后各时段（1d、3d、7d、14d、21d）均小于正常组（p＜0.05）。细胞移植治疗组与损伤对照组BBB评分比较，1d、3d、7d组均无差异（p＞0.05）14d、21d出现显著差异（p＜0.05），有统计学意义。结论：1．脊髓损伤后直接移植的转绿色荧光蛋白的基因鼠的骨髓基质干细胞能存活，并远处迁移。2．BBB评分显示移植骨髓基质干细胞可以促进脊髓损伤的功能恢复。3．脊髓损伤后bFGF表达的变化，提示其参与了脊髓损伤后对神经元的保护作用。4．MSCs移植后增强了内源性bFGF的表达，推测MSCs参与了脊髓损伤的修复。目的：探讨实验性大鼠脊髓挫伤后急性期前炎症因子：肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）在脊髓内的表达变化以及大剂量地塞米松对其表达的影响。方法：健康成年雌性SD大鼠90只（体重220-250g），随机分成15组：正常对照组、脊髓挫伤（于T11-T12节段挫伤）1h组、3h组、6h组、12h组、24h组、36h组、48h组，脊髓挫伤后地塞米松干预1h组、3h组、6h组、12h组、24h组、36h组、48h组，每组6只。动物模型制作：采用改良的Allen氏WD法建立脊髓（T12节段）损伤模型；取损伤处尾侧脊髓入4％多聚甲醛后固定，恒温冷冻切片机作20μm厚的连续冰冻切片，间隔取片后，做常规HE染色和用抗TNF-α和抗IL-6行免疫组织化学方法染色，在光镜下观察各组脊髓内TNF-α和IL-6的分布及阳性细胞计数，利用HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统检测TNF-α和IL-6免疫阳性反应物的平均灰度值。应用SPSS11.0软件包单因素方差分析。结果：1．正常大鼠脊髓组织没有见到TNF-α和IL-6的阳性表达；2．TNF-α在脊髓损伤后即有表达，主要分布于脊髓神经元的胞浆及神经胶质细胞。免疫阳性反应在损伤后1h开始增强，24h达高峰，后逐渐下降，于48小时回落到正常；损伤后地塞米松干预后1h仍有免疫阳性产物，于6h达高峰，且峰值较前降低，12h后逐渐减少，至48h恢复正常。3．IL-6在脊髓损伤后即有表达，主要分布于神经元胞浆及神经胶质细胞。免疫阳性反应在损伤后1h开始增强，12h达高峰，后逐渐下降，于48h回落至正常；损伤后地塞米松治疗后1h、3h、6h仍有免疫阳性反应，于6h达高峰，且峰值较前降低，12h后逐渐降低，至48h恢复正常。结论：1．正常脊髓组织内无TNF-α、IL-6的表达。2．TNF-α和IL-6在脊髓损伤后即出现，但持续时间较短，48h消失，提示它们参与了脊髓损伤的炎症反应。3．大剂量地塞米松对TNF-α、IL-6有明显的抑制作用。推测DEX在治疗脊髓损伤时除了已知的抗炎作用外，还可能具有神经保护作用。

论文目录

第一部分

中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分