糖对黄瓜子叶节培养物成花的影响及其差异蛋白质组的研究

论文摘要

本实验通过黄瓜离体子叶节花芽分化实验体系,初步探索糖种类和浓度对植物成花的影响;并应用蛋白质组学方法和生物信息学技术,在蛋白质水平上探讨植物成花的机理。实验结果如下:1、组织培养实验结果显示:无糖或高糖处理不利于成花。在添加0.3mg/L PP333的基础上,1.5%蔗糖+1.5%果糖处理的直接花分化率最高;成花培养中蔗糖是基本的因素。果糖的最佳供应时间在开始培养后的48-72h。在供糖基础上,添加GA3处理对成花的影响不明显;添加ABA处理可提高直接花分化率;适度抑制乙烯有利于成花。2、建立并优化双向电泳实验条件,结果表明:应采用酚抽提法制备蛋白质干粉,第一向等电聚焦固相pH梯度胶条（24cm）的最适蛋白上样量为1200μg,第二向SDS-PAGE使用11.5%T的分离胶等条件,有助于提高黄瓜离体子叶节总蛋白质双向电泳的分辨率和重复性。3、通过对PP333诱导的黄瓜离体子叶节花芽分化的差异蛋白研究,经双向电泳检测到蛋白点有1000个左右,质谱分析鉴定出15个差异表达蛋白点,其中可确认有意义的差异蛋白点有5个,分别为14-3-3蛋白（R2）、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶大亚基（R5和R9）、甲硫氨酸合酶（R10）、氨基肽酶（R16）和60S酸性核糖体蛋白（R20）。这些蛋白与光合作用、代谢作用、翻译过程及信号转导等关系密切,可能在黄瓜成花中起着不同的作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中文文摘
• 第1章 绪论
• 1.1 糖在成花中的作用
• 1.1.1 糖与激素的联系
• 1.1.2 糖与成花基因的表达
• 1.1.3 糖信号对成花的影响
• 1.2 差异蛋白质组学在植物研究中的应用
• 1.2.1 差异蛋白质组学的产生及含义
• 1.2.2 差异蛋白质组学的研究方法与技术
• 1.2.3 植物差异蛋白质组学的研究进展
• 1.3 本研究的背景和意义
• 第2章 糖对黄瓜离体子叶节培养物花芽分化的影响
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 实验器材与药品
• 2.2.2 实验方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 不同种类和浓度糖对黄瓜离体子叶节花芽分化的影响
• 333结合处理对黄瓜离体子叶节花芽分化的影响'>2.3.2 糖与PP₃₃₃结合处理对黄瓜离体子叶节花芽分化的影响
• 2.3.3 两种糖结合处理对黄瓜离体子叶节花芽分化的影响
• 2.3.4 蔗糖、葡萄糖和果糖的正交实验结果
• 3结合处理对黄瓜离体子叶节花芽分化的影响'>2.3.5 糖与GA₃结合处理对黄瓜离体子叶节花芽分化的影响
• 2.3.6 糖与ABA结合处理对黄瓜离体子叶节花芽分化的影响
• 2.3.7 糖与乙烯抑制剂结合处理对黄瓜离体子叶节花芽分化的影响
• 2.3.8 果糖脉冲实验的结果
• 2.4 讨论
• 第3章 黄瓜离体子叶节蛋白质双向电泳条件的优化
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 组织培养材料与方法
• 3.2.2 双向电泳材料与方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 蛋白质含量标准曲线
• 3.3.2 蛋白质干粉制备方法的比较
• 3.3.3 SDS-PAGE分离胶浓度的比较
• 3.3.4 样品溶液蛋白上样量的比较
• 3.4 讨论
• 3.4.1 蛋白质干粉制备方法的影响
• 3.4.2 裂解液和水化液溶剂的影响
• 3.4.3 上样量的影响
• 3.4.4 胶条平衡的影响
• 3.4.5 SDS-PAGE胶浓度的影响
• 333处理黄瓜子叶节花芽分化的差异蛋白组研究'>第4章 PP₃₃₃处理黄瓜子叶节花芽分化的差异蛋白组研究
• 4.1 前言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 组织培养材料与方法
• 4.2.2 双向电泳材料与方法
• 4.2.3 二维凝胶电泳分析
• 4.2.4 差异蛋白质的质谱分析
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 黄瓜离体子叶节差异蛋白点的检测
• 4.3.2 黄瓜离体子叶节差异蛋白点的 MALDI-TOF-TOF/MS分析及PMF数据库查询的结果
• 4.3.3 鉴定的差异蛋白氨基酸序列及其生物学功能
• 4.4 讨论
• 4.4.1 双向电泳图谱分析
• 4.4.2 鉴定结果及 PMF数据搜索
• 333处理黄瓜离体子叶节成花的差异蛋白的生物学功能预测'>4.4.3 PP₃₃₃处理黄瓜离体子叶节成花的差异蛋白的生物学功能预测
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果
• 致谢
• 个人简历