论文摘要
冷缺血时间对大鼠胰岛分离纯化的影响目的糖尿病是常见的内分泌代谢疾病，其引发的多种并发症严重危害人们的身心健康，只有建立内源性胰岛素分泌系统才能根治糖尿病。目前主要有胰腺移植和胰岛移植两种方法能达到此治疗目的。虽然目前胰岛移植对外源性胰岛素依赖性的解除不如胰腺移植高，但与胰腺移植相比具有安全、简便、利于体外移植物修饰、不良反应较低和可重复性等优点，已成为很有发展前景的方法。成功的胰岛移植需要多次移植足够量的高质量胰岛。胰腺低温保存的时间和获得的胰岛数目、活性有密切关系。UW液是目前应用最广、最有效的胰腺保存液。临床研究表明UW液在低温下（4℃）保存供胰用于胰岛移植不宜超过8-9小时。本实验用UW液在4℃低温下保存大鼠胰腺不同时间，研究冷缺血对获得的胰岛数目和质量的影响。材料与方法1、动物及分组SD大鼠，雌雄不限，体重250-300g，购自中国医科大学动物中心，根据实验大鼠的胰腺保存时间不同，随机分为8组（0小时组，3小时组，6小时组，9小时组，12小时组，15小时组，18小时组，21小时组），每组5只大鼠。2、胰岛的获取用UW液原位灌注大鼠胰腺后切取并放置于UW液中低温保存。向大鼠胰管内逆行灌注胶原酶溶液使胰腺充分膨胀，放在37±1℃水浴中振荡消化12-15min。终止消化后，两次离心洗涤，经80目不锈钢筛过滤，Ficoll梯度离心法纯化胰岛，浓度分别为25％、23％、20.5％和11％，从23％和20.5％之间交界处及20.5％和11％之间交界处吸取胰岛、。3、观察指标获取的胰岛用双硫腙（DTZ）染色来计算分离胰岛数目并判断所提胰岛的纯度，丫啶橙／溴乙啶（AO／EB）荧光染色法显示胰岛细胞活率，体外葡萄糖刺激下胰岛素释放试验及兔抗鼠胰岛素抗体免疫组织化学染色检测胰岛活性。4、统计学分析将所得数据用均值±标准差表示，采取方差分析q检验，P＜0.05认为有统计学意义，所有数据用SPSS11.5软件处理。结果保存时间在6小时以内，各保存组获得胰岛的数量、纯度、活率及活性与未经保存的0小时组相比无明显差别（P＞0.05）。保存时间超过6小时，各保存组获得胰岛的数量、纯度、活率及活性与0小时组相比有明显差别（P＜0.05），并且随着时间的延长，后一组比前一组均有下降。当超过15小时，获得的胰岛数目、纯度及活性明显下降。18小时组胰岛数目171IEQ／只，活性41％，纯度44％，低于临床上的胰岛移植标准（活性＞75％，纯度＞50％）。结论1、UW液低温保存大鼠胰腺6小时之内获得胰岛的数量及质量较好。2、UW液低温保存大鼠胰腺在6到15小时之内，获得胰岛的数量及质量有下降，但仍可用于移植。3、UW液低温保存大鼠胰腺超过15小时不宜用于胰岛移植。