辣椒根腐病拮抗细菌的筛选鉴定及其作用效果的初步研究

论文摘要

由腐皮镰孢菌（Fusarium solani （Mart.） App. et Wollenw）侵染引起的辣椒根腐病是一种典型的土传病害,部分地区由于该病的危害,轻者辣椒减产20%～30%,重者达50%以上,甚至绝产。目前对土传病害的主要防治方法是以杀菌谱广、见效快的化学药剂防治,但病原菌极易对其产生抗药性,导致化学农药施用量不断增加,造成农药残留量增大、生态平衡被破坏,已对人类的健康和安全造成威胁。因此,寻找新药剂或更有效的途径防治土传病害极为重要。筛选对病原菌有拮抗作用的细菌、真菌、放线菌等微生物,是采用生物防治手段控制土传病害的有效途径。然而,不当的分离筛选方法会带来巨大的工作量,且筛选的菌株应用到田间防病效果差甚至无效。本文旨在通过一种快速有效的分离筛选方法,从黑龙江省辣椒根际土壤中筛选能够防治辣椒根腐病的拮抗细菌;且对辣椒安全,具有促进生长的潜力;并明确了其分类学地位。采用平板对峙试验—胚根试验—盆栽试验的系统筛选方法,以Fusarium solani为指示菌,从黑龙江省辣椒根际土壤中筛选得到4株拮抗细菌,分别命名为菌株D221、II621、15-1-1、19-2-3。选取菌株D221、II621、15-1-1进行研究。盆栽防病试验表明,在播种期分别采用灌根、浸种及移栽期采用灌根的施用方式,拮抗细菌D221、II621、15-1-1均能够有效防治辣椒根腐病（F. solani）,移栽试验的防效分别为73.18%、72.67%、70.86%;菌株D221、II621对辣椒根腐病的防效显著高于15%恶霉灵AS,菌株15-1-1对辣椒根腐病的防效与15%恶霉灵AS防效相当。对大豆疫霉菌（Phytophthora sojae）、尖镰孢菌（Fusarium oxysporum）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、麦根腐平脐蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana）、核盘菌（Sclerotinia sclerotinorum）、大丽花轮枝孢菌（Verticillium dahliae）、串珠镰孢菌（Fusarium moniliforme）、腐皮镰孢菌（F. solani）均有明显的拮抗作用。拮抗细菌D221、II621、15-1-1均能够促进种子发芽并提高发芽的整齐度,显著抑制病原菌（F. solani）孢子萌发,进而抑制其对辣椒种子的侵害;促进辣椒胚根伸长,胚根分别增长34.33%、37.61%、33.83%。经形态学、生理生化特性及分子生物学鉴定,菌株D221、II621为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,菌株15-1-1为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。菌株D221、II621、15-1-1的序列已在GenBank中注册,序列号分别为JF495161、JF495162、JF495163。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 1. 引言
• 1.1 辣椒根腐病的研究进展
• 1.1.1 辣椒根腐病的概述
• 1.1.2 辣椒根腐病的防治现状
• 1.2 拮抗细菌的研究进展
• 1.2.1 植物根际促生细菌
• 1.2.2 主要的拮抗细菌种类及其在植物病害防治中的应用
• 1.2.3 拮抗细菌的作用机制
• 1.2.4 拮抗细菌的分离筛选方法
• 1.2.5 拮抗细菌的鉴定方法
• 1.2.6 拮抗细菌在植物病害防治中的优势
• 1.2.7 拮抗细菌在生物防治中存在的问题
• 1.3 研究的目的意义
• 2. 试验材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 供试土样
• 2.1.2 供试病原菌
• 2.1.3 供试植物品种
• 2.1.4 主要试剂、药品及培养基
• 2.1.5 主要仪器设备
• 2.1.6 生物信息学途径及其相关网站
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 拮抗细菌的分离筛选
• 2.2.2 拮抗细菌防病促生作用的研究
• 2.2.3 拮抗细菌的鉴定
• 2.2.4 数据分析方法
• 3. 结果与分析
• 3.1 土壤中拮抗细菌的分离筛选
• 3.1.1 细菌的分离
• 3.1.2 平板对峙试验筛选拮抗细菌
• 3.1.3 胚根试验筛选拮抗细菌
• 3.1.4 盆栽试验筛选拮抗细菌
• 3.2 拮抗细菌的防病促生作用
• 3.2.1 拮抗细菌对辣椒的防病作用
• 3.2.2 拮抗细菌对病原真菌的抑菌作用
• 3.2.3 拮抗细菌对辣椒种子发芽的影响
• 3.2.4 拮抗细菌对辣椒胚根伸长的影响
• 3.3 拮抗细菌的鉴定结果
• 3.3.1 拮抗细菌的形态学及生理生化特性
• 3.3.2 拮抗细菌的分子生物学特性
• 4. 讨论
• 4.1 从土壤中筛选拮抗细菌的意义
• 4.2 拮抗细菌分离筛选方法的探讨
• 4.3 拮抗细菌鉴定方法的探讨
• 4.4 拮抗细菌施用方法的探讨
• 4.5 拮抗细菌的应用前景
• 5. 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文