TNF-α、IL-10单核甘酸多态性与乙型肝炎病毒感染临床转归的相关性研究

论文摘要

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染是一个全球性的问题,严重危害着人类的健康和生活质量。HBV感染人体后可导致不同的临床结局,从自限性感染者、无症状携带者、隐匿性感染者到急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化直至原发性肝癌。目前国内外研究大多集中于HBV本身,认为病毒的不同基因型或病毒基因某些位点的突变是导致感染HBV后产生不同临床转归的原因。事实上,人类感染HBV后,病毒能否被彻底清除,是否导致慢性化,更大程度上取决于个体的抗病毒免疫水平,与免疫因素相关的个体遗传背景是影响乙型病毒性肝炎转归的重要因素。T细胞免疫在乙肝病毒致病过程中起着重要作用,它不仅在控制病毒复制方面有着决定性作用,而且在乙肝病毒肝损伤方面扮演重要角色。实验表明乙肝病毒抗原特异性细胞毒T淋巴细胞（HBV antigens specific cytotoxic lymphocytes,HBVsCTL）应答在乙肝感染中有着重要作用。HBV感染初期HBVsCTL能完全清除HBV而不引起免疫损伤,随着特异性细胞毒T细胞数的减少,非特异性免疫活性细胞在肝内浸润、凋亡激活,引起肝脏损伤。杀伤性T细胞（CTL）亚群的变化与CD4+辅助性T细胞（Th）及其细胞因子密切相关。Th细胞分为三类:Th0、Th1、Th2;Thl类细胞因子（TNF-α、IL-2、IFN-γ）促进细胞免疫,对HBVsCTL的功能有辅佐作用,有利于病毒的清除;而Th2类细胞因子（IL-10、IL-6、IL-4）则对Thl细胞有抑制作用,它抑制细胞免疫,增强体液免疫,主要与组织损伤及慢性化有关。这些与Th细胞相关的细胞因子密切影响着HBV对组织细胞的损伤,病毒的清除和疾病的慢性化。近年来研究发现多种细胞因子编码区、调节区或信号序列区存在多态性,影响着细胞因子的表达与分泌,与HBV感染的慢性化相关。单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNP）指人类基因组核苷酸序列中发生频率大于1%的单个碱基变异（不包括缺失、插入与重复）。SNP是DNA多态性的一种,其数目众多、分布广泛且相对稳定,各细胞因子基因都存在多个SNP位点,而各位点不同基因型可能与HBV感染机体后不同临床结局有关。其中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白介素-10（IL-10）作为Th细胞亚群的两个重要因子,其启动子区单核苷酸多态性影响着他们的表达,并可能与HBV感染的临床转归存在联系。目的:检测河北地区汉族人群感染乙型肝炎病毒后不同临床结局者TNF-α与IL-10启动子区单核苷酸多态性分布,探讨其多态性与乙肝病毒感染不同临床转归的相关性,为乙肝病毒的预防与基因治疗奠定理论基础。方法:本研究包括乙肝病毒自限性感染者57例,乙肝病毒健康携带者51例,慢性乙型肝炎61例,乙肝肝硬化患者82例;所有标本提取DNA后,应用等位基因特异性引物-聚合酶链反应（AS-PCR）法检测TNF-α-238、-308与IL-10-816位点单核苷酸多态性,并每种基因型选取一例进行直接测序;比较各组等位基因与基因型的分布,并收集相关的临床资料进行相关性分析。结果:1本实验共测定SNP位点753次,其中744次检测成功,成功率98.8%;同时检测到TNF-α-238及-308位AA基因型,频率分别为1.6%（4例）与0.8%（2例）,与抽取的直接测序结果完全相符。2 TNF-α基因启动子区-238（G/A）位点SNP多态性与HBV感染后临床转归相关。其中GG基因型在肝硬化组（76.3%）、慢乙肝组（78.7%）较自限性感染者组（87.5%）、健康携带者组（88.2%）明显减少（p<0.05）;GA基因型明显增多（p<0.05）;A等位基因频率在肝硬化组（13.1%）、慢乙肝组（11.4%）较自限性感染者组（7.1%）、健康携带者组（5.9%）明显增高（p<0.05）;慢乙肝组与肝硬化组,自限性感染者组与健康携带者组之间基因型分布与等位基因频率比较无显著性差异（p>0.05）。3 TNF-α基因启动子区-308（G/A）位点SNP多态性与HBV感染后临床转归可能无关。基因型（GG、GA、AA）分布及G、A等位基因频率在自限性感染者、健康携带者、慢乙肝、肝硬化四组之间比较差异无显著性（p>0.05）。4 IL-10基因启动子区-819（T/C）位点SNP多态性与HBV病毒感染后临床转归相关。其中TT基因型在肝硬化组（59.3%）、慢乙肝组（55.7%）分布较自限性感染者组（35.1%）、健康携带者组（37.2%）明显增多（p<0.05）,CT基因型明显减少（p<0.05）,C等位基因频率在肝硬化组（28.4%）、慢乙肝组（29.5%）较自限性感染者组（43.0%）、健康携带者组（41.1%）明显减少（p<0.05）;肝硬化组与慢乙肝组,自限性感染者组与健康携带者组之间比较无显著性差异（p>0.05）。5 IL-10基因启动子区-819（T/C）位点TT基因型中肝硬化者（39.7%）、慢乙肝者（28.1%）所占比率明显高于TC、CC基因型（p<0.05）;T等位基因中肝硬化者（35.5%）所占比率明显高于C等位基因（p<0.05）;其他病例组在各基因型及T、C等位基因中所占比率无明显差别（p>0.05）。结论:1采用AS-PCR方法可以简便的检测出细胞因子基因启动子区单核苷酸多态性基因型分布。2 TNF-α基因启动子区-238位不同基因型和A等位基因可能与个体感染HBV后临床转归相关。3未发现TNF-α基因启动子区-308位不同基因型和等位基因与乙肝临床转归的相关性。4 IL-10基因启动子区-819位不同基因型和T等位基因可能与个体感染HBV后的易感性及慢性化相关。

论文目录

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• 研究论文 TNF-α、IL-10 单核苷酸多态性与乙型肝炎病毒感染临床转归的相关性研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 细胞因子单核苷酸多态性与乙型肝炎病毒感染临床转归的关系
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