降糖药格列齐特和复方吡格列酮二甲双胍人体药代动力学研究

论文摘要

第一章：格列齐特片在人体的药代动力学研究本实验建立了准确高灵敏的LC MS/MS法测定格列齐特在血浆中的浓度，以研究格列齐特片在人体内的药代动力学和生物等效性。本法以格列吡嗪为内标，血浆样品经甲醇600μL沉淀蛋白后，取上清液进样；以水溶液(含10mmol·L-1乙酸铵和0.2%乙酸)-甲醇（10：90，v/v）为流动相，采用Lichrospher C18柱分离，通过电喷雾离子化，三重四级杆质谱正离子选择性离子反应（SRM）进行测定。用于定量分析的离子反应分别为[M+H]+ m/z 324@18V→m/z 127.2（格列齐特），[M+H]+m/z 446@15V→mz 321.1（格列吡嗪）。该方法在0.03 - 10.0μg·mL-1范围内线性关系良好（r =0.9999），低、中、高三种浓度样品绝对回收率均大于75.0%，相对回收率为82.3%～109.5%，批内批间精密度良好RSD<15.0%。对20例健康男性志愿受试者进行双周期双交叉试验，随机单剂量口服格列齐特（80 mg）参比制剂或受试制剂后，用LC MS/MS法测定血浆中格列齐特的浓度，测得参比制剂与受试制剂药代动力学参数AUC0–t，AUC0?∞，Cmax，Tmax和t1/2分别为(82.00±38.15μg·h·mL-1和80.93±34.54μg·h·mL-1),93.53±60.55μg·h·mL-1和93.81±50.32μg·h·mL-1), (4.24±0.96μg·mL-1和4.21±0.99μg·mL-1), （3.6±1.2 h和4.1±1.2 h）和（17.07±6.48 h和17.90±7.00h），相对生物利用度（F）为（99.4±12.2）%。对参数AUC、Cmax进行双单侧t检验，Tmax经非参数法检验无显著性差异（P＞0.05），表明格列齐特受试制剂和参比制剂生物等效。第二章：吡格列酮二甲双胍片在人体的药代动力学研究本实验分别建立了HPLC-UV法测定人血浆中的吡格列酮浓度及LC-MS法测定人血浆中的二甲双胍浓度，评价健康受试者在服用吡格列酮二甲双胍片后，吡格列酮及二甲双胍在健康受试者体内的药代动力学特征。将健康受试者口服吡格列酮二甲双胍片后吡格列酮和二甲双胍的药代动力学参数分别与文献报道的相同剂量下吡格列酮和二甲双胍人体的药代动力学参数进行比较，来评价使用复方吡格列酮二甲双胍片后吡格列酮和二甲双胍之间有无相互作用。本实验采用HPLC-UV法测定吡格列酮在健康受试者体内的血药浓度，以布洛芬为内标，流动相为乙腈- 20 mmol·L-1乙酸铵缓冲液（55：45，v/v）；检测波长：225 nm；血浆样品经盐酸酸化后，用乙醚/二氯甲烷提取，结果表明：血浆杂质不干扰样品的测定，色谱峰形良好。吡格列酮的线性范围为25–2000 ng·mL-1，绝对回收率为81.2%～99.0%，相对回收率为88.0%～104.5%，低、中、高三种浓度的批间批内变异均小于10.0%，样品在室温下放置4 h、冻融3次及冰冻21天条件下均稳定性良好。结果表明所建立的方法符合生物样品分析要求。本实验采用LC-MS法测定二甲双胍在健康受试者体内的血药浓度，以伪麻黄碱为内标，流动相为甲醇-水溶液(含2 mmol·L-1乙酸铵和0.3%甲酸)（56：44，v/v）；通过电喷雾离子化，质谱正离子选择性离子检测（SIM）进行测定。检测对象分别为二甲双胍：[M+H]+m/z 129.9，伪麻黄碱（内标）：[M+H]+ m/z 147.9；血浆样品经甲醇沉淀蛋白后，进样测定；结果表明：血浆杂质不干扰样品的测定，色谱峰形良好。二甲双胍的线性范围为0.05 - 5.0μg·mL-1，绝对回收率为82.4～99.6%，相对回收率为88.0～104.3%，低、中、高三种浓度的批间批内变异均小于15.0%，样品在室温下放置6 h、冻融3次及冰冻27天条件下均稳定性良好。结果表明所建立的方法符合生物样品分析要求。分别比较了复方吡格列酮二甲双胍片中吡格列酮和二甲双胍的药代动力学参数与文献报道的相同剂量下吡格列酮和二甲双胍药代动力学参数，结果表明使用复方吡格列酮二甲双胍片后吡格列酮和二甲双胍药物之间可能无相互作用。将健康受试者多剂量口服复方吡格列酮二甲双胍片与单剂量口服复方吡格列酮二甲双胍片后的药代动力学参数进行比较，结果显示多剂量给药后吡格列酮和二甲双胍在体内可能无蓄积。比较两种给药剂量后的药代动力学参数，结果表明在给药剂量范围内，吡格列酮和二甲双胍的AUC0-t, Cmax都明显提高，提示存在剂量依赖关系。将低、高两个剂量组的AUC和Cmax进行剂量和体重校正后进行性别单因素方差分析，结果表明吡格列酮和二甲双胍AUC和Cmax在正常人体内的过程无明显性别差异。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 格列齐特片在人体的药代动力学研究
• 前言
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 仪器
• 1.3 试验条件的选择
• 1.4 样本测定
• 2 方法学考察
• 2.1 方法的特异性
• 2.2 标准曲线的制备及定量下限测定
• 2.3 回收率试验（绝对回收率）
• 2.4 准确度试验（相对回收率）
• 2.5 基质效应
• 2.6 精密度试验
• 2.7 稳定性试验
• 3 试验设计
• 3.1 试验方案
• 3.2 数据分析
• 4 试验结果
• 4.1 血药浓度－时间曲线
• 4.2 药代动力学参数及生物利用度
• 4.3 生物等效性评价
• 5 分析与讨论
• 6 小结
• 7 参考文献
• 8 本课题的新颖之处
• 第二章 复方吡格列酮二甲双胍在人体的药代动力学研究
• 前言
• 第一节 复方吡格列酮二甲双胍中吡格列酮在人体的药代动力学研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 仪器
• 1.3 试验条件的选择
• 1.4 样本测定
• 2 方法学考察
• 2.1 方法的特异性
• 2.2 标准曲线的制备及定量下限测定
• 2.3 回收率试验（绝对回收率）
• 2.4 准确度试验（相对回收率）
• 2.5 精密度试验
• 2.6 稳定性试验
• 3 试验设计
• 3.1 试验方案
• 3.2 药代动力学参数的估算
• 4 试验结果
• 4.1 平均血药浓度- 时间曲线
• 4.2 药代动力学参数
• 5 分析与讨论
• 第二节 复方吡格列酮二甲双胍中二甲双胍在人体的药代动力学研究
• 6 材料与方法
• 6.1 试验材料
• 6.2 仪器
• 6.3 试验条件的选择
• 6.4 样本测定
• 7 方法学考察
• 7.1 方法的特异性
• 7.2 标准曲线的制备及定量下限测定
• 7.3 回收率试验（绝对回收率）
• 7.4 准确度试验（相对回收率）
• 7.5 基质效应
• 7.6 精密度试验
• 7.7 稳定性试验
• 8 试验设计
• 8.1 试验方案
• 8.2 药代动力学参数的估算
• 9 试验结果
• 9.1 平均血药浓度－时间曲线
• 9.2 药代动力学参数计算结果
• 10 分析与讨论
• 11 小结
• 12 参考文献
• 13 本课题的新颖之处
• 综述
• 参考文献
• 攻读学位期间发表论文情况
• 致谢