抗人IgGγ链单克隆抗体的研究及其在VEGF人源化单克隆抗体检测中的应用

论文摘要

目的:制备人IgGγ链（重链）单克隆抗体及其杂交瘤细胞,并对其研究和鉴定。将其应用于人源抗体的扩大培养,分离纯化以及生物制品质量控制中,建立起一种方便,快速,特异性强,重复性好的定量检测方法。 方法:分离纯化人血清中的IgG以最佳免疫途径免疫雌性Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0在融合剂聚乙二醇（PEG,MW4000）作用下融合,筛选并建立人IgGγ链单克隆抗体（McAb 612）杂交瘤细胞株（MKIG12）。以人IgGγ链（重链）单克隆抗体包被酶标板,以辣根过氧化物酶标记人IgGγ链（重链）单克隆抗体为已知抗体兼显色抗体,建立了检测人源抗体的双抗夹心ELISA法。 结果:经SDS-PAGE证实纯化人IgG由轻链26.44 KD（1链24KD,κ型和λ型）和重链52.73 KD（h链即γ链,50～55KD）两亚单位组成。杂交瘤MKIG12经鉴定,具有以下特征:①杂交瘤MKIG12连续传代120d,抗体分泌稳定:②染色体数目较多（100条）,

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 2 材料和仪器
• 2.1 主要化学试剂
• 2.2 主要仪器和设备
• 3 方法与步骤
• 3.1 人IgG的纯化
• 3.2 抗人IgGγ链单克隆抗体的制备
• 3.3 杂交瘤细胞株的鉴定
• 3.4 抗体的酶标记
• 3.5 检测抗原双抗夹心法的建立
• 4 结果与分析
• 4.1 人IgG柱层析
• 4.2 人IgG的SDS-PAGE分析
• 4.3 检测单抗间接ELISA法的建
• 4.4 最佳免疫途径
• 4.5 杂交瘤细胞株的建立
• 4.6 人IgG的蛋白印迹分析
• 4.7 抗人IgGγ链单克隆抗体的分型
• 4.8 抗人IgGγ链单克隆抗体的特异性
• 4.9 抗人IgGγ链单克隆抗体的效价
• 4.10 杂交瘤的稳定性
• 4.11 杂交瘤的染色体
• 4.12 检测抗原双抗夹心法的建立
• 4.13 标准曲线的建立
• 4.14 试验的重复性
• 5 讨论
• 5.1 免疫途径的差异
• 5.2 人IgG的纯化依据和选择
• 5.3 影响杂交瘤技术中细胞成功融合的因素
• 5.4 McAb的的特异性
• 5.5 结语
• 6 参考文献
• 7 附录（试剂配制）
• 8 小结
• 9 致谢
• 10 文献综述