转DREB1A基因结缕草（Zoysia japonica Steud.）生理检测及其子代的分子鉴定和抗寒性评价

论文摘要

在以前的研究工作中,本实验室采用基因枪转化方法获得了具有生物安全性的转DREB1A基因结缕草,本研究对其进行了表型观测及抗性生理的检测。经过大田生长的表型观测和抗旱、耐盐、抗寒胁迫处理,对质膜透性、MDA含量、SOD与POD活性等生理指标进行测定,结果表明:转基因植株比对照抗旱、耐盐性有不同程度的提高。在此基础上,筛选出具有一定抗逆能力的转基因株系22株。在进行套袋强迫自交后,对自交所得后代进行了分子鉴定,PCR扩增和Southern杂交,结果表明:DREB1A基因能够在后代中遗传,并确定了10个转基因株系。对这10个转基因株系进行苗期的耐寒性分析,最终筛选出4个苗期抗寒性强的株系。对比亲子代的抗逆性,选育出4个稳定遗传了亲代外源基因并表现出一定抗性的转基因株系。本研究获得的转DREB1A基因的株系己于2007年11月获得了中华人民共和国森林转基因生物安全管理办公室的安全评价,现已进入中间试验。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 综述
• 1.1 转基因草坪草的国内外研究进展
• 1.1.1 草坪草的转基因研究进展
• 1.1.2 结缕草的转基因研究进展
• 1.2 DREB 转录因子及其在植物抗逆中的作用
• 1.2.1 DREB 转录因子
• 1.2.2 DREB 转录因子与植物抗逆性
• 1.3 转基因草坪草的检测
• 1.3.1 转基因草坪草的分子生物学检测
• 1.3.1.1 聚合酶链式反应技术
• 1.3.1.2 Southern 杂交分析
• 1.3.1.3 Western、Northern 杂交分析
• 1.3.2 转基因草坪草的生理检测
• 1.3.3 转基因草坪草子代的遗传检测
• 1.4 转基因草坪草目前遇到的问题和发展方向
• 1.5 本研究的目的与内容
• 1.5.1 研究的目的
• 1.5.2 研究内容
• 1.5.3 技术路线
• 2 T0 亲代植株的大田扩繁及其抗性的表型观测
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 转基因结缕草田间生长情况
• 2.2.2 转 DREB1A 基因结缕草枯黄返青期的观测
• 2.2.3 转 DREB1A 基因结缕草绿期的观测
• 2.3 结论与讨论
• 2.3.1 转DREB1A 基因对结缕草生长的影响
• 2.3.2 转DREB1A 基因对结缕草绿期的影响
• 3 转 DEB1A 基因结缕草 T0 代抗性生理检测
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 测试指标与测试方法
• 3.1.3 实验方法
• 3.1.3.1 细胞膜透性的测定
• 3.1.3.2 丙二醛（MDA）含量的测定
• 3.1.3.3 过氧化物酶（POD）活性的测定
• 3.1.3.4 超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定
• 3.1.3.5 脯氨酸（PRO）含量的测定
• 3.1.3.6 过氧化氢酶（CAT）含量的测定
• 3.1.3.7 叶片相对含水量（RWC）的测定
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 耐旱性
• 3.2.1.1 水分胁迫对转DREB1A 基因结缕草水分状况的影响
• 3.2.1.2 水分胁迫对转DREB1A 基因结缕草渗透调节物质的影响
• 3.2.1.3 水分胁迫对转DREB1A 基因结缕草相对电导率的影响
• 3.2.1.4 水分胁迫对转DREB1A 基因结缕草细胞保护酶的影响
• 3.2.1.5 抗旱性综合评定
• 3.2.2 材料耐寒性分析
• 3.2.2.1 低温胁迫对转DREB1A 基因结缕草质膜透性的影响
• 3.2.2.2 低温胁迫对转DREB1A 基因结缕草丙二醛含量的影响
• 3.2.2.3 低温胁迫对转DREB1A 基因结缕草细胞保护酶活性的影响
• 3.2.2.4 抗寒性综合评定
• 3.3 结论与讨论
• 3.3.1 植株生理指标的测定
• 3.3.2 提高植株抗旱、耐盐及抗寒性的途径
• 4 T1 代植株的自交育种
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 植物材料
• 4.1.2 试验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.3 结论与讨论
• 4.3.1 结论
• 4.3.2 讨论
• 5 T1 代植株的发芽及发芽耐盐性分析
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 植物材料
• 5.1.2 实验方法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 种子发芽试验
• 5.2.2 种子发芽耐盐性分析
• 5.2.2.1 盐胁迫对发芽率和发芽势的影响
• 5.2.2.2 盐胁迫对发芽指数的影响
• 5.2.2.3 盐胁迫对胚根胚芽比的影响
• 5.3 结论与讨论
• 5.3.1 发芽率、发芽势和发芽指数
• 5.3.2 胚根胚芽比
• 6 T1 代植株的分子生物学检测
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 植物材料
• 6.1.2 抗性植株的分子检测
• 6.1.2.1 植物DNA 的提取
• 6.1.2.2 抗性植株的PCR 分析
• 6.1.2.3 抗性植株的Southern 印迹杂交
• 6.2 结果与分析
• 6.2.1 植株DNA 的提取
• 6.2.1.1 试剂盒法（CTAB）提取植物DNA
• 6.2.1.2 SDS 法提取的植物DNA
• 6.2.2 抗性植株的PCR 扩增
• 6.2.3 抗性植株的Southern 杂交
• 6.3 结论与讨论
• 7 T1 代植株苗期抗寒性分析
• 7.1 材料与方法
• 7.1.1 植物材料
• 7.1.2 试验方法
• 7.1.2.1 材料的筛选
• 7.1.2.2 材料处理
• 7.1.2.3 测定方法
• 7.2 结果与分析
• 7.2.1 转基因结缕草低温下相对电导率的变化
• 7.2.2 转基因结缕草低温下丙二醛含量的变化
• 7.2.3 转基因结缕草低温下脯氨酸含量的变化
• 7.2.4 转基因结缕草低温下抗寒综合评定
• 7.3 结论与讨论
• 8. 结论与讨论
• 8.1 结论
• 8.2 讨论
• 参考文献
• 附图I
• 附图Ⅱ
• 附图III
• 个人简介
• 导师简介
• 致谢