安徽白山羊多胎性能相关分子标记的AFLP筛选

论文摘要

为了提高山羊繁殖性能,以增加山羊规模化生产的经济效益,为高繁殖力山羊标记辅助育种提供基础材料,以黄淮山羊的安徽地方类群（安徽白山羊）不同繁殖率群体为试验对象,进行了扩增片断长度多态性（AFLP,amplified fragment length polymorphism）分析.试验设计了8条EcoRⅠ和8条TaqⅠ引物,共计64对引物组合,采集了10只高繁殖性能（连续3胎,每胎产4羔以上）的多胎安徽白山羊和10只低繁殖性能（连续3胎,每胎只产1羔）的安徽白山羊的耳组织样,构建了代表安徽白山羊高繁殖力和低繁殖力的两个池DNA,利用AFLP技术分析了安徽白山羊两个极端群体DNA水平的差异,以期获得与安徽白山羊多胎性能相关的分子标记,并通过这些分子遗传标记加快多胎安徽白山羊的选育进展,为安徽白山羊的进一步选育提供一定的理论依据.研究结果表明,AFLP技术适用于山羊基因组DNA的差异分析。实验AFLP图谱条带清晰、丰富,共获得32条差异片段,其中阳性差异片段24条,阴性差异片段8条。选择其中差异条带多、清晰的引物组合12对进行了重复实验,所获得的差异条带经过回收、TA克隆测序获得两条差异条带的序列信息,一条序列长374bp,另一条序列长254bp。所获得的两条差异条带序列经比对后发现374bp的序列存在同源序列,而254bp的序列没有同源序列.为验证AFLP分析所获得的序列能否作为安徽白山羊多胎性能的分子标记,实验根据比对结果针对374bp的序列,重新设计引物,并进行了PCR-RFLP分析验正。实验采集了104只安徽白山羊耳组织样,其中高产群12只,低产群14只,普通群78只。结果在安徽白山羊群体中发现两种基因型,其中AA型12只,AB型92只,没有发现BB型.高产群、低产群和普通群的AB基因型频率、AA基因型频率分别为0.9167,0.7123,0.9103和0.0833,0.2857,0.0897。高产群和普通群的AA基因型频率都比相应的低产群要低,可推测等位基因B对安徽白山羊高繁殖性能有正向作用,而A基因对安徽白山羊的繁殖性能有负向效应。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一章 文献综述
• 1 安徽白山羊简介
• 1.1 地理分布
• 1.2 外貌特征
• 1.3 生产性能
• 2 AFLP技术简介
• 2.1 AFLP技术原理
• 2.2 AFLP反应流程与方法
• 2.3 AFLP技术特点
• 2.4 AFLP技术关键
• 3 AFLP技术在动物遗传育种中的应用
• 3.1 动物品种（系）的鉴定与保护
• 3.2 构建遗传图谱和QTL定位
• 3.3 遗传多样性和亲缘关系的分析
• 3.4 性别鉴定
• 3.5 新基因发现
• 3.6 甲基化的研究
• 4 PCR-RFLPs技术原理
• 5 分子标记研究进展
• 5.1 国外家畜多胎性分子标记研究进展
• 5.2 国内家畜多胎性分子标记研究进展
• 第二章 实验一 安徽白山羊多胎性能相关分子标记的AFLP筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 实验分组
• 1.4 凝胶电泳检测
• 1.5 池DNA构建及模板DNA稀释
• 1.6 AFLP分析流程
• 1.7 差异片断回收、克隆及测序
• 1.8 差异片断序列分析
• 2 结果与分析
• 2.1 样本DNA的检测
• 2.2 基因组DNA的酶切及人工接头的连接
• 2.3 预扩增
• 2.4 64对引物选择性扩增初步筛选结果
• 2.5 差异条带的引物组合的再扩增与重复性验证
• 2.6 差异片断的回收和克隆
• 2.7 差异片断序列分析
• 3 讨论
• 3.1 AFLP标记技术与山羊遗传育种研究
• 3.2 影响AFLP效率的主要因素分析
• 第三章 实验二 安徽白山羊多胎性能AFLP差异序列的RFLP验证
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 基因组DNA检测
• 2.2 酶切结果与相关性分析
• 2.3 差异序列的基因频率及基因型频率
• 3 讨论
• 3.1 实验操作技术的优化
• 3.2 限制性内切酶酶切问题
• 3.3 存在问题
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间发表的论文