论文摘要
目的探讨BUB1B基因突变、表达及甲基化与喉鳞癌发生发展的相关性。材料和方法一、标本来源及制备40例标本来自于中国医科大学第一附属临床医院。患者均经病理诊断为喉鳞状细胞癌，均为首发病例，术前未经放疗和化疗。术后所取标本立即储存在-70℃冰箱中。取冻存肿瘤标本，连续5μm切片3～5片，进行HE染色。显微镜选择间质细胞含量少于10％的癌巢区，做好标记。然后从癌巢区取材，同时取距癌灶2cm以上正常组织作为对照。将所取样品置液氮中速冻后锤击粉碎，收集于1.5ml Eppendorf管中，用于DNA、RNA和蛋白质的制备。二、方法自40例术前未经化疗和放疗的喉鳞状细胞癌患者的新鲜手术标本中，分别取配对癌组织和癌旁正常组织进行以下检测：1、提取总RNA，反转录合成cDNA，利用半定量RT-PCR的方法以β-actin为内参，癌旁正常组织为对照，分析BUB1B基因在喉鳞癌组织中的mRNA表达水平。2、提取蛋白质，利用Western blot的方法以β-actin蛋白为内参，癌旁正常组织为对照，分析BUBR1蛋白质在喉鳞癌组织中的表达情况。3、提取DNA，采用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）结合DNA测序的方法检测BUB1B基因在喉鳞癌组织中的突变情况。4、利用甲基化敏感的限制性核酸内切酶法检测BUB1B基因启动子区域在喉鳞癌组织及癌旁正常组织中的甲基化情况。结果1、癌组织BUB1B基因mRNA表达／β-actin表达平均密度比值（ADV）为0.863±0.178，癌旁正常组织为1.124±0.382。40％（16／40）癌组织BUB1B基因mRNA表达低于癌旁正常组织（t=2.92，P＜0.05），有统计学意义。2、Western blot分析发现在40例病例中14例癌组织BUBR1蛋白质表达低于癌旁正常组织，占35％（t=2.35，P＜0.05）。16例mRNA低表达的喉鳞癌组织中11例BUBR1蛋白质也呈现低表达（x2=10.99，P＜0.01）。以上经分析均具有统计学意义。3、PCR-SSCP结合DNA测序的方法检测BUB1B基因在喉鳞癌和邻近正常组织中的突变情况，结果未检测到基因序列的改变。4、利用甲基化敏感的限制性核酸内切酶法检测BUB1B基因启动子区域的甲基化情况，结果在40例肿瘤组织中检测到12例伴有甲基化（x2=7.01，P＜0.01），有统计学意义。5、16例mRNA低表达中9例伴有甲基化（x2=14.34，P＜0.01），有统计学意义。6、14例BUBR1蛋白质低表达中6例伴有甲基化（x2=9.96，P＜0.01），有统计学意义。上述结果表明在喉鳞癌组织中BUB1B基因的突变率是很低的，启动子区甲基化与低表达相关。提示启动子区甲基化可能是引起该基因低表达的主要原因之一，在喉鳞状细胞癌的发生发展中起作用。结论研究证实BUB1B基因异常与喉鳞癌发生发展相关，该基因在喉鳞癌组织中的突变率是很低的，并KmRNA和蛋白质表达低于邻近正常组织。发现在喉鳞癌组织中该基因启动子区甲基化与该基因低表达相一致。提示启动子区甲基化可能是引起该基因低表达的主要原因。
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相关论文文献
- [1].纺锤体检测点蛋白BUB1B在胃癌组织中的表达及意义[J]. 中国现代医学杂志 2013(15)
- [2].BUB1B在原发性肝癌中的表达及对肝癌细胞增殖和侵袭的影响[J]. 新医学 2019(04)