论文摘要
目的: MicroRNA（miRNA）是一种大约20-22个核苷酸大小的小分子非编码RNA,是一大类新发现的在转录后水平负性调节基因表达的基因调节因子。它们调节了多种生物学信号通路。最近研究提示,miRNAs除在肿瘤中发生表达异常外,还存在遗传变异和突变,在肿瘤发生发展中起重要作用。miRNA基因突变可能是引起胰腺癌发生的一个重要因素。在本实验中,我们假设了miRNA基因的遗传变异可能与胰腺癌的发生有关。方法:我们在6例肿瘤细胞株和20例胰腺癌组织标本中,检测了编码8种miRNA前体的基因序列。当一个突变被发现以后,使用TaqMan MicroRNA Assays检测发生突变的miRNA在肿瘤细胞株及胰腺癌组织标本中的表达水平,并通过启动子实验及miRNA前体二级结构的预测探寻可能引起miRNA表达水平改变的分子机制。结果:在pri-miRNA序列区间中,我们一共发现的4种全新的突变。TaqMan microRNA检测显示,相对于癌旁组织和正常胰腺组织,miR-21的表达水平在20例胰腺癌组织样本及6种肿瘤细胞株中为显著高表达（P<0.05）。位于miR-21基因的2种突变,并没有显著改变miRNA基因的启动子活性（P>0.05）。尽管绝大部分发现的突变并没有对miRNA的加工过程产生明显的影响,但在pre-miR-21下游29个碱基的一个A G突变导致了靠近pre-miR-21茎环结构区域的二级结构发生了改变。这个突变也同时导致了成熟miR-21表达相对下降。讨论:这些结果说明miRNA可能在胰腺癌的发生中具有重要的作用,但是miRNA基因特定序列的变异导致基因表达改变的分子机制还有待研究。
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