整合素αvβ3反义基因治疗肝细胞性肝癌的实验研究

整合素αvβ3反义基因治疗肝细胞性肝癌的实验研究

论文摘要

目的:原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其组织学类型主要为肝细胞型肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC),约占90%以上。目前的诸多研究已明确血管生成和肿瘤的生物学行为密切相关。肝癌是富血管性肿瘤,其高血供、高转移、高复发的特点提示人们血管生成在肝癌的恶性生物学行为中扮演着十分重要的角色。研究发现,整合素α vβ3不仅在多种实体肿瘤细胞表面有高水平的表达,而且在肿瘤组织新生血管内皮细胞有强烈表达。因此,选择整合素α vβ3的反义基因、单克隆抗体或者拮抗肽,来治疗肿瘤的实验是近年肿瘤研究的一个热点。本实验旨在研究整合素α vβ3反义基因治疗裸鼠皮下种植性肝癌的疗效,以及对肝癌血管生成及细胞凋亡的影响,进一步探讨整合素α vβ3在肿瘤发生、发展中的作用,为肝癌的治疗提供新的思路。 方法:将α vβ3反义基因表达载体AlphaV/pcDNA3、Beta3/pcDNA3转入感受态细菌,细菌扩大培养,质粒大提后酶切鉴定。4-6周龄雄性裸鼠120只,随机分为4组,每组30只,体重18±1.84克。裸鼠皮下接种肝癌细胞系HepG2,建立肝癌模型。采用Fugene6转染试剂、瘤内注射方法,每组分别用α v、β3及α vβ3的反义基因进行基因治疗(对照组注射空壳质粒),观察肿瘤生长情况,记录肿瘤大小。6周后切取肿瘤秤重,计算抑瘤率。采用免疫组织化学S-P法分别检测α v、β3蛋白以及CD31、VEGF的表达,计数微血管密度(microvessel density,MVD)。采用TUNEL法(TdT-mediated biotinylated-dUTP nick end labling method)检测各组的细胞凋亡情况,并计算凋亡指数(apoptosis index,AI)。并对各组间α v、β3蛋白以及VEGF的表达、MVD、AI进行比较。 结果:(1) 各组肿瘤生长大小有明显差异,对照组肿瘤体积最大,为

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