人类神经突起因子真核表达系统的构建及功能的初步研究

论文摘要

神经营养因子是一类由神经元靶细胞分泌的蛋白质或多肽分子,与相应受体特异的结合后,被轴突末端摄取,经轴浆逆行运输至神经元胞体,维持神经元存活,促进神经生长及受损神经再生和修复,防止神经细胞退变或调亡。由于神经营养因子在神经再生修复中的不可忽视的重要作用,所以在各种脑血管意外、神经系统退行性疾病的预防和治疗方面有着广阔的应用前景。 神经突起因子,是一种新的神经营养因子,在1993年由美国麻省理工学院的Elly Nedivi在Nature杂志上首次作为可塑性相关候选基因（Candidate Plasticity-related genes,CPG15）报道,并于1997年由以色列科学家Naeve正式命名为Neuritin。此后Elly Nedivi与Naeve进行了一系列的相关研究,认为:Neuritin能够促进神经突起的快速生长和分支,其表达与中枢神经系统中神经细胞的生长、分化及可塑性密切相关;脑源性神经营养因子（BDNF）及神经活动激活Neuritin的表达。故他们推测Neuritin可能是神经营养因子和神经活动的共同下游因子,但neuritin基因具体的功能及作用机制尚不十分明确。 目前,本课题组在国内率先克隆了人类neuritin基因,并采用生物信息学手段较全面的分析了Neuritin的结构和可能的功能.在已有工作的基础上,本研究着手构建人类neuritin基因真核表达系统,并进行其功能的初步研究. 首先,我们利用基因重组技术,将人类neuritin基因的开放读框克隆至真核表达载体pcDNA4.0中,经酶切鉴定、测序分析结果正确,然后以脂质体Tfx-20介导pcDNA4.0—neuritin转染真核细胞PC12,最后通过RT-PCR,免疫细胞化学染色及细胞形态学观察,检测neuritin基因在PC12细胞内的表达。 结果显示,我们成功的构建了neuritin基因的真核表达载体pcDNA4.0-neuritin,在转染PC12细胞后,获得了neuritin基因在mRNA水平上的瞬时表达,并初步证明重组表达的Neuritin使PC12细胞发生类神经元细胞的形态变化,这为下一步探讨neuritin基因的功能及作用机制奠定了基础。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 主要符号表
• 前言
• 第一部分 构建神经突起因子真核表达重组体
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 第二部分 脂质体介导转染大鼠嗜铬细胞瘤株（PC12）
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 文献综述
• 致谢
• 作者简介
• 导师评语