导读:本文包含了体外细胞培养论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:共培养模型,微核试验,人源性代谢酶系统
体外细胞培养论文文献综述
蔡文建,张意,陈宵,李忠生,肖经纬[1]（2019）在《以微核试验为基础的体外细胞系共培养模型的构建》一文中研究指出目的考虑到动物种属的差异性,作为致癌性评估的筛选试验,国内外的致突变实验研究体系正在从细菌和动物体细胞、生殖细胞向人源性细胞过渡。作为体系的重要组成部分,代谢活化系统构建的特异性和可行性就成为研究的关键,为了满足体内复杂环境的真实代谢条件,本研究旨在构建人源性肝细胞系和肠细胞系共培养模型,并在此基础上进行微核试验,以探索所构建的肝肠细胞共培养体系在致突变研究中的应用。材料和方法选择肝细胞系HepG2细胞和肠细胞系Caco-2细胞建立共培养模。将Caco-2细胞接种在Transwell上层,HepG2细胞接种在六孔板底层,各自贴壁后将Transwell上层浸入六孔板中,应用MEM培养基作为共培养基。以OECD推荐的致突变实验结果评价参考化学物环磷酰胺(CP)、甲磺酸乙酯(EMS)为阳性物,CCK-8测定两种典型致突变物对HepG2细胞的半数抑制浓度。以半数抑制浓度为高剂量组,依次设置中、低剂量组和溶剂、空白对照组(CP为38、19和9.5μg·mL~(-1),EMS为1.3、0.65和0.325μg·mL~(-1))。共培养24 h后,对共培养细胞和单独培养的HepG2细胞进行染毒。24 h后共培养模型移去上层的Caco-2细胞,向下层的HepG2细胞和单独培养的HepG2细胞加入细胞松弛素B,进行胞质分裂阻滞微核试验,制片后进行盲法阅片,每个浓度组计数2000个双核细胞的微核率。结果不需要代谢活化的致突变物甲磺酸乙酯,单培养组的微核率分别为16‰、15‰、16‰,共培养组微核率分别为14‰、16‰、15‰),二者的微核率无明显差异(P>0.05)。CP共培养组微核率(21‰、18‰、16‰)明显高于单独培养组(微核率12‰、13‰、12‰),差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用HepG2细胞与Caco2细胞的共培养模型和单独培养的HepG2细胞进行微核试验的比对性研究表明,对需要代谢活化的典型致突变物,共培养模型的敏感性较单培养的HepG2细胞高,且该模型通过模拟人体内的多细胞环境和人源性代谢酶系统,可以为今后的致突变系统研究的建立提供有益的工作基础。(本文来源于《中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集》期刊2019-09-17）
李熙惠[2]（2019）在《通过体外细胞培养观察血液透析对内皮细胞功能的变化及其可能机制》一文中研究指出【目的】本研究通过体外培养不同环境下的内皮细胞,观察单次血液透析对内皮细胞功能的变化,研究不同因素与内皮细胞生长的关系及其可能存在的机制。【方法】1.收集2018年6月至2018年11月在广西医科大学第一附属医院体检部随机挑选40例健康体检者和在广西医科大学第一附属医院血液净化中心进行维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)的77例患者的血清干预内皮细胞,检验其增殖能力和迁移能力,同时检测两组血清尿素肌酐(creatinie,Cr)、β2-微球蛋白(β2-MGicroglobulin,β2-MG)含量,用酶联免疫吸附法(Elisa)检测白介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量;2.用不同浓度的肌酐、β2-MG、IL-6、IS培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),检测其增殖活性和迁移距离;3.用肌酐、β2-MG、IL-6和IS组处理24小时后,使其正常化,继续培养24h和48h后,检测各组细胞的增殖活性,推测其是否建立尿毒症毒素记忆;4.用MHD患者做单次血液透析(HD)治疗前后的血清干预内皮细胞,检测其增殖能力和迁移能力,同时检测两组血清的肌酐、β2-微球蛋白和IL-6;5.分析肌酐、β2-MG、IL-6和内皮细胞增殖功能的相关性,并计算出线性回归方程。【结果】1.CKD患者的细胞增殖能力均高于健康组,CKD患者HD前的细胞增殖能力均高于治疗后的细胞增殖能力,差异有显着性(P<0.05);2.健康组与MHD患者的肌酐、β2-MG和IS的差异有统计学意义(P<0.05),MHD患者透析前肌酐和β2-MG水平显着高于透析治疗后水平,IL-6水平透析治疗后水平较透析治疗前低,其差异有统计学意义(P<0.05);3.随着肌酐和IS浓度的增加,肌酐、β2-MG和IS分别对内皮细胞增殖的抑制作用也逐步增加(P<0.05),但是IL-6对内皮细胞的增殖有促进作用,其促进作用随浓度的增加而增加(P<0.05);4.肌酐、β2-MG和IS抑制内皮细胞的愈合能力,且其作用随浓度的增加而增加;IL-6促进内皮细胞愈合能力,且其作用随浓度的增加而增加;5.与对照组相比,撤去干预条件后,肌酐、β2-MG和IS的增殖抑制率随着时间的增加而逐渐减小,同时IL-6促进增殖率也随着时间的增加而逐渐减小;6.Pearson相关分析显示细胞OD值与肌酐(r=0.640,P<0.01)、β2-MG(r=0.633,P<0.01)呈正相关,与IL-6呈负相关(r=-0.540,P<0.01),并得出线性回归方程为y=0.000039a+0.002b-0.001c。【结论】肌酐、β2-MG和IS抑制内皮细胞的增殖和迁移,IL-6促进内皮细胞和迁移;血液透析通过改变尿毒症毒素(肌酐、β2-MG和IL-6)浓度,改变对内皮细胞的影响。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-05-01）
王娜娜[3]（2018）在《传染性支气管炎病毒体外细胞培养体系的初探》一文中研究指出传染性支气管炎病毒(infections bronchitis virus,IBV)是当前影响我国及世界养禽业的主要病原之一。除Beaudette株外,其他毒株难以在体外细胞系中传代培养,严重限制了该病毒感染与致病机制研究及新型疫苗的研发。为研究传染性支气管炎病毒(IBV)除Beaudett株外均难以在体外传代培养的影响因素,本研究首先应用流式细胞术检测IBV经典毒株M41囊膜与宿主细胞膜融合程度,发现M41可以在体外培养条件下侵入鸡的细胞系LMH和DF1,但荧光定量PCR检测显示侵入的M41无法增殖。通过对比分析已发表的M41易感组织气管、非易感组织脾脏及LMH细胞全基因组转录谱数据,本研究发现宿主细胞粘附、细胞周期、p53及SRC可能是M41在体外培养细胞中增殖的宿主决定因素。本研究通过在2D培养体系中预先孵育Gelatin和3D培养两种方式来调节细胞粘附的物理环境,发现两种方法均可以促进M41在体外培养细胞中的增殖;利用多种经典细胞周期抑制剂及p53和SRC活性调控分子预先处理LMH和DF1,发现细胞周期、p53活性及SRC活性对IBV体外增殖无显着影响。本研究表明细胞粘附特性是影响IBV体外增殖的重要因素,初步为IBV体外细胞培养体系的建立提供了部分理论依据。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2018-06-01）
王新旺,周乐斌,梅劲,张德明,刘丹[4]（2018）在《猪兔鼠肾生物支架制备及体外细胞共培养探究》一文中研究指出目的灌注制备家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾去细胞生物支架,探究叁种肾支架对共培养种子细胞HEK的影响。方法取健康成年家猪10头、新西兰白兔28只、SD大鼠28只,分别将取出的肾脏随机均等分为正常组和支架组,支架组由肾动脉依次灌入肝素、1%Triton X-100和1%SDS溶液完成去细胞化。两组肾分别作组织形态学鉴定并检测机械力学性质。去细胞支架作组织爬片与人胚肾上皮细胞共培养,观察细胞在支架爬片上的生长状况,免疫荧光检测人胚肾上皮细胞PCNA及DAPI表达量作灰度分析。结果家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾脏经灌注去细胞后HE核染色阴性,Masson染色显示胶原蛋白阳性,Collagen I和Collagen IV荧光染色阳性,电镜扫描可见去细胞支架内蜂窝状孔洞结构,并可见典型的肾小球龛样结构;支架组弹性模量与正常组肾弹性模量差异无显着性,支架组PCNA/DAPI值均高于空白对照组,而叁种支架组之间PCNA/DAPI值无显着性差异。结论本研究灌注去细胞方法可去除家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾内的细胞及细胞核,保留细胞外基质,维持细胞外基质的叁维空间结构和机械力学强度,是一种可靠有效的制备叁者肾去细胞生物支架方法,灌注制备的去细胞支架均可提高异种共培养人胚肾上皮细胞HEK的增殖活性,且这种提高作用在家猪、新西兰白兔和SD大鼠之间并无物种差异性。(本文来源于《中国临床解剖学杂志》期刊2018年02期）
杨子楠,廖贵清[5]（2017）在《简易体外细胞压应力加载培养装置的构建及应用》一文中研究指出研究目的:细胞力学是组织工程和细胞工程的基础之一,在离体培养过程中对细胞施加不同的机械力以研究应力的影响是细胞力学的一个重要研究领域。本研究为了模拟在体外培养条件下对细胞施加流体静压力,构建了一个简易体外细胞压应力加载培养装置并应用于实验当中。研究方法:此装置包括了压力培养罐、微压传感器、可编程序控制器以及微型气泵。通过在可编程序控制器上编写控制程序来控制微型气泵的运行,进而调节培养罐内的气体压力以控制细胞受到的流体静压力。系统的压力加载范围在0mmHg到120mmHg之间。研究结果:利用该装置对人舌鳞癌细胞进行加压培养,细胞生长良好,可用于进一步实验。研究结论:该装置具有良好的准确性与可靠性,适用于在体外研究恒定流体静压力下细胞的变化。(本文来源于《2017全国口腔颌面——头颈肿瘤外科学术研讨会论文集》期刊2017-08-04）
邱宣[6]（2017）在《体外细胞培养模型中新型肾毒性生物标志物的研究》一文中研究指出急性肾损伤是指肾功能的急剧下降,包括但不局限于急性肾衰竭。在临床上,药物诱发的急性肾损伤占所有肾损伤病例的33%左右。而在新药研发过程中,药物肾毒性往往是候选药物被迫中断后续开发的主要原因之一,如何快速准确地评价肾毒性已成为药物研发中的一个重要问题。近年来,在临床和临床前大鼠肾损伤研究中,一些新型肾毒性生物标志物已被证实在早期检测和灵敏度上都要优于传统的肌酐和尿素氮,并且具有损伤部位的特异性。但随着对实验动物“3R”原则的倡导与实施,以及动物与人体种属差异性造成的临床前数据外推至人体的局限性,建立准确、高通量的体外评价替代方法,已逐渐成为肾毒性研究的一个发展趋势。这些新的生物标志物能否在体外评价中更加准确、灵敏地预测肾毒性尚有待研究。随着中药在临床上的广泛应用,中药引起的肾损伤日益受到人们的重视,是继抗生素、解热镇痛药以外药物性肾损害的重要病因之一,已成为制约中药现代化和临床应用的一大障碍。中药成份复杂、靶点多,引起肾毒性的病理表现和毒性机制更为复杂多样,而采用动物实验对中药成份进行毒理学研究则耗时耗力。因此,寻找准确可靠的中药肾毒性体外毒性评价方法也是中药现代化的发展趋势。为了探求在肾毒性体外评价模型中更为灵敏、特异的早期检测指标,并建立中药肾毒性体外评价体系。本课题采用肝肾毒性药物,建立药物肾毒性的体外评价模型,筛选肾细胞模型中潜在的肾毒性生物标志物,比较各检测指标在不同肾细胞模型上对肾毒性的预测效能,并初步探索新型生物标志物在中药肾毒性体外评价中的应用。以肾毒性药物庆大霉素、顺铂、马兜铃酸Ⅰ和环孢素为阳性工具药,以肝毒性药物环磷酰胺、硫唑嘌呤和无肝肾毒性药物左旋多巴为阴性对照,考察药物对L-02细胞、MDCKII细胞、HK-2细胞和RPTEC/TERT1细胞的毒性作用。肾毒性药物庆大霉素、顺铂、马兜铃酸1和环孢素在L-02细胞中半数抑制浓度(IC50)值高于MDCKII细胞、HK-2细胞和RPTEC/TERT1细胞:肝毒性药物硫唑嘌呤和环磷酰胺在L-02细胞中IC50值低于MDCKII细胞、HK-2细胞和RPTEC/TERT1细胞;阴性对照药物左旋多巴在四种细胞的IC50值都大于10000 μM。肝毒性和肾毒性药物在肝肾细胞上IC50值的差异,可初步筛选药物的潜在靶器官毒性。另外,分别选择肾毒性药物庆大霉素、顺铂、马兜铃酸Ⅰ和环孢素各自IC50的1/5和2/5浓度处理四种细胞24 h,均能诱导细胞早期凋亡,且凋亡率具有浓度依赖性,说明肾毒性药物对肝肾细胞的细胞毒性作用是由凋亡诱导的。这些结果为生物标志物的筛选确定了合适的药物浓度。在肾毒性药物庆大霉素、顺铂、马兜铃酸Ⅰ和环孢素诱导MDCKII细胞、HK-2细胞和RPTEC/TERT1细胞发生凋亡的情况下,检测传统酶学生物标志物和新型生物标志物的水平,筛选出了潜在的高灵敏度生物标志物。相对于溶媒对照组,在MDCKII细胞,药物组的新型生物标志物丛生蛋白(clusterin)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)、骨桥蛋白(osteopontin)和传统酶学生物标志物乳酸脱氢酶(LDH)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)有显着性差异;在HK-2细胞,药物组的新型生物标志物clusterin、CysC、osteopontin、肾损伤因子-1(KIM-1)、谷胱甘肽转移酶π(GSTπ)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)和传统酶学生物标志物LDH、GGT有显着性差异;在RPTEC/TERT1细胞,药物组的新型生物标志物clusterin、CysC、TIMP-1、GSTπ和传统酶学生物标志物LDH、GGT有显着性差异。这些生物标志物有成为肾毒性体外评价检测指标的潜在优势,其灵敏度和特异性还需更多化合物的验证。采用22种化合物(12种肾小管毒性药物,10种非肾小管毒性药物),通过logistic回归和受试者工作特征(ROC)分析,进一步评价HK-2细胞和RPTEC/TERT1细胞中细胞毒性指标细胞存活率(cell viability)、传统酶学生物标志物(GGT、LDH)和新型生物标志物(clusterin、KIM-1、CysC、GSTπ、osteopontin、NGAL、TIMP-1)的预测效能。在HK-2细胞,生物标志物的预测效能依次是KIM-1>clusterin>osteopontin>CysC>NGAL>TIMP-1 = GSTπ = LDH>cell viability = GGT;KIM-1、clusterin和osteopontin的联合分析,预测效能相对于单个生物标志物明显提高。在RPTEC/TERT1细胞,生物标志物的预测效能依次是CysC = clusterin>TIMP-1>GSTπ>LDH = GGT>cell viability;CysC 和 clusterin 的联合分析预测效能比 CysC、clusterin高。结果表明,在HK-2细胞和RPTEC/TERT1细胞模型中,新型生物标志物的预测效能明显高于传统的细胞毒性指标和传统酶学生物标志物。最后,采用16种中药单体,进一步验证了 HK-2细胞中新型生物标志物KIM-1、osteopontin、clusterin、CysC、TIMP-1、NGAL对中药肾小管毒性的预测效能明显高于传统的细胞毒性指标cell viability。在最佳阈值时,这些新型生物标志物对中药肾小管毒性的阳性预测值、阴性预测值、灵敏度和特异性明显高于细胞毒性指标。本研究建立的基于新型生物标志物的肾毒性体外替代方法,对肾毒性的预测效能明显高于传统的细胞毒性指标,提高了肾毒性体外评价的灵敏度和靶器官特异性,将有助于新药研发的化合物早期筛选和毒性机制研究。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2017-06-01）
李荣荣,赵彦文,周军,高美娟,牛金城[7]（2017）在《体外细胞培养低氧控制装置的研制》一文中研究指出目的为更近似地模拟细胞在体内所处的低氧环境,研制一种低氧控制装置,以实现对体外细胞培养氧气浓度的自动化控制。方法体外细胞培养低氧控制装置由计算机控制的硬件和软件组成,硬件包括氧气控制与检测系统、氮气管路、细胞培养和抗干扰优化装置,软件是基于C语言的系统开发套件。当控氧仪经氧气传感器读取的氧气浓度值大于设定值时,氮气管路开放,氮气进入培养箱;当达到设定值时,氮气管路关闭,氮气不能通入,如此不断循环往复,从而使氧气浓度达到某一水平并维持稳定。通过将装置设定的氧气浓度与测氧仪测得的箱内实际氧气浓度进行比较及对氧气浓度达设定值后的波动情况进行监测,进一步验证装置的可行性。结果体外细胞培养低氧控制装置设定的氧气浓度与测得的箱内实际氧气浓度差异无统计学意义(P>0.05),且该装置对设定值模拟的精度可达±0.5%的要求,满足系统预定精度要求,并可保持较长时间稳定。结论本装置能有效控制氧气浓度达所需要求,能满足在低氧条件下进行体外细胞培养的要求。(本文来源于《口腔疾病防治》期刊2017年05期）
黄一凡,王帅,孟宪生,包永睿[8]（2016）在《基于HepG2体外细胞培养的旋覆花抗肿瘤有效组分的提取工艺》一文中研究指出目的优选旋覆花抗肿瘤有效组分的提取工艺。方法采用正交实验设计,对影响提取工艺的3个因素(提取时间、提取次数、乙醇用量)进行考察,以肿瘤抑制率为考察指标来优选最佳提取工艺。同时结合层次分析法,优选以总黄酮含有量和出膏率为综合评价指标的权重系数及其范围,并采用Pearson相关性分析对其进行验证。结果最佳工艺条件为20倍量55%乙醇,回流提取3次,每次1 h。以总黄酮含有量和出膏率为指标的综合权重系数范围为0.75~0.90、0.10~0.25。结论该优化工艺在保证药效的前提下,简化了考察指标,避免了复杂的操作,可为其他中药材有效组分提取工艺的优选提供了思路和方法。(本文来源于《中成药》期刊2016年02期）
姜利芳[9]（2015）在《基于体外细胞培养的鼠李糖脂毒理与药理作用研究》一文中研究指出鼠李糖脂是一种生物表面活性剂,具有优越的表／界面活性、低毒性等特点,在医药领域有广阔的应用前景。美国环境保护局的报告认为大鼠口服鼠李糖脂无毒性(LD50>5000 mg/kg),然而,较多文献发现鼠李糖脂对体外培养的细胞有较大毒性。迄今为止,未见文献解释其大鼠口服是安全的但细胞毒性却比较大的矛盾现象。因此,本文首先采用多种细胞研究鼠李糖脂细胞毒性的产生机理；随后采用静脉注射给药的方式验证鼠李糖脂的体内安全性,并分别用模拟胃液、蛋白结合和基于细胞培养的体外代谢及吸收模型对其体内外毒性差异的原因进行解析。在此基础上,本文进一步采用体外细胞模型评价了其促口服吸收和抗纤维化的作用,开展了鼠李糖脂在医药领域的潜在应用研究。首先,本文采用单层贴壁细胞对鼠李糖脂的细胞毒性进行评价,并阐释了其毒性机理。结果表明,鼠李糖脂对两株癌细胞(HepG2和Caco-2)以及一株正常细胞系(HK-2)呈现类似的毒性：无血清培养基中,单、双鼠李糖脂的最小毒性浓度分别为10和20 mg/L；含10%血清培养基中,单、双鼠李糖脂的最小毒性浓度分别为100和150 mg/L。因此,血清能够有效减弱鼠李糖脂的细胞毒性。本文首次发现,鼠李糖脂将培养基表面张力降低至约41 mN/m以下时产生细胞毒性,而血清通过减缓鼠李糖脂引起的培养基表面张力下降抑制其毒性。采用阴离子化学表面活性剂SDS和SDBS验证培养基表面张力与细胞毒性之间的关系,结果发现它们也在溶液表面张力降至约41 mN/m以下时引起细胞毒性,说明通过降低溶液表面张力导致细胞毒性可能是其共同的细胞毒性机理。其次,本文采用静脉注射给药方式验证了鼠李糖脂在大鼠体内的安全性,并以体外模型解析其体内无显着毒性的原因。与口服相比,鼠李糖脂的静脉注射毒性略高,在1500 mg/kg时引起轻微肝肿大和脾脏淤血,但未发现其它器官毒性。模拟胃酸的结果表明,鼠李糖脂在胃酸中溶解度比较低,为900 mg/L左右；平衡透析法测得鼠李糖脂的蛋白结合率为92%以上；凝胶包埋肝细胞模型预测鼠李糖脂易被肝脏代谢(肝萃取率在65%左右)；小肠细胞模型揭示鼠李糖脂极易被小肠吸收(吸收率为100%)。根据以上体外模型的结果,我们推测鼠李糖脂口服安全的原因可能是：其大部分在胃酸中析出,少部分被小肠吸收进入血液后和血浆蛋白结合,使其血液浓度较低,其易被肝脏代谢的特性又使其血液浓度进一步降低。本文还采用Caco-2细胞模型分别评价了鼠李糖脂对叁条小肠吸收途径的影响,考察其促口服吸收的作用。实验发现,150 mg/L的鼠李糖脂分别提高旁路运输药物(酚红)和穿细胞途径药物(普萘洛尔)的表观渗透系数达7.4倍和2倍,而且可以使外排蛋白P-gp的活性下降78%。此外,还发现鼠李糖脂将花青素在Caco-2模型上的渗透系数提高到了1.8-2.6倍。最后,本文采用体外上皮和成纤维细胞模型考察了鼠李糖脂的抗细胞纤维化作用。以TGF-β1分别诱导肺上皮细胞A549和人皮肤成纤维细胞,转化得到肌成纤维细胞,并评价了鼠李糖脂对肌成纤维细胞的特异性毒性。结果表明鼠李糖脂在基本不影响A549及成纤维细胞活率和功能的情况下,对肌成纤维细胞有明显毒性,诱导其凋亡,有效降低其收缩和分泌胶原的能力,且抑制其特异性蛋白α-SMA的表达。综上所述,本文研究了鼠李糖脂的细胞毒性机理,并采用体外模型对其动物体内安全的原因进行了解释,有助于其在医药学领域的应用研究；同时开展了其促口服吸收和抗纤维化的研究,为将其可能作为新药或新型药物助剂奠定了技术基础。(本文来源于《浙江大学》期刊2015-08-10）
李新磊,周荣,彭涛[10]（2015）在《丙型肝炎病毒体外细胞培养系统研究进展》一文中研究指出丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是单股正链RNA病毒,属黄病毒科(Flaviviridae),丙型肝炎病毒属(Hepacivirus)。HCV是导致慢性肝炎、肝硬化和肝癌的主要致病原之一。根据我国国家卫生和计划生育委员会(原卫生部)的数据统计发现,2002-2013年我国丙型肝炎发病人数以年均29.7%的速率递增,2013年的发病人数超过20万,(本文来源于《中国病毒病杂志》期刊2015年01期）
体外细胞培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】本研究通过体外培养不同环境下的内皮细胞,观察单次血液透析对内皮细胞功能的变化,研究不同因素与内皮细胞生长的关系及其可能存在的机制。【方法】1.收集2018年6月至2018年11月在广西医科大学第一附属医院体检部随机挑选40例健康体检者和在广西医科大学第一附属医院血液净化中心进行维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)的77例患者的血清干预内皮细胞,检验其增殖能力和迁移能力,同时检测两组血清尿素肌酐(creatinie,Cr)、β2-微球蛋白(β2-MGicroglobulin,β2-MG)含量,用酶联免疫吸附法(Elisa)检测白介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量;2.用不同浓度的肌酐、β2-MG、IL-6、IS培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),检测其增殖活性和迁移距离;3.用肌酐、β2-MG、IL-6和IS组处理24小时后,使其正常化,继续培养24h和48h后,检测各组细胞的增殖活性,推测其是否建立尿毒症毒素记忆;4.用MHD患者做单次血液透析(HD)治疗前后的血清干预内皮细胞,检测其增殖能力和迁移能力,同时检测两组血清的肌酐、β2-微球蛋白和IL-6;5.分析肌酐、β2-MG、IL-6和内皮细胞增殖功能的相关性,并计算出线性回归方程。【结果】1.CKD患者的细胞增殖能力均高于健康组,CKD患者HD前的细胞增殖能力均高于治疗后的细胞增殖能力,差异有显着性(P<0.05);2.健康组与MHD患者的肌酐、β2-MG和IS的差异有统计学意义(P<0.05),MHD患者透析前肌酐和β2-MG水平显着高于透析治疗后水平,IL-6水平透析治疗后水平较透析治疗前低,其差异有统计学意义(P<0.05);3.随着肌酐和IS浓度的增加,肌酐、β2-MG和IS分别对内皮细胞增殖的抑制作用也逐步增加(P<0.05),但是IL-6对内皮细胞的增殖有促进作用,其促进作用随浓度的增加而增加(P<0.05);4.肌酐、β2-MG和IS抑制内皮细胞的愈合能力,且其作用随浓度的增加而增加;IL-6促进内皮细胞愈合能力,且其作用随浓度的增加而增加;5.与对照组相比,撤去干预条件后,肌酐、β2-MG和IS的增殖抑制率随着时间的增加而逐渐减小,同时IL-6促进增殖率也随着时间的增加而逐渐减小;6.Pearson相关分析显示细胞OD值与肌酐(r=0.640,P<0.01)、β2-MG(r=0.633,P<0.01)呈正相关,与IL-6呈负相关(r=-0.540,P<0.01),并得出线性回归方程为y=0.000039a+0.002b-0.001c。【结论】肌酐、β2-MG和IS抑制内皮细胞的增殖和迁移,IL-6促进内皮细胞和迁移;血液透析通过改变尿毒症毒素(肌酐、β2-MG和IL-6)浓度,改变对内皮细胞的影响。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
体外细胞培养论文参考文献
[1].蔡文建,张意,陈宵,李忠生,肖经纬.以微核试验为基础的体外细胞系共培养模型的构建[C].中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集.2019
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[4].王新旺,周乐斌,梅劲,张德明,刘丹.猪兔鼠肾生物支架制备及体外细胞共培养探究[J].中国临床解剖学杂志.2018
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