胶质细胞生长因子-2在颅脑损伤中作用的研究及其基因重组蛋白制备

论文题目: 胶质细胞生长因子-2在颅脑损伤中作用的研究及其基因重组蛋白制备

论文类型: 博士论文

论文专业: 外科学

作者: 薛亚军

导师: 卢亦成,董艳,朱诚,胡国汉,骆纯

关键词: 颅脑外伤,基因治疗,阳离子脂质体,原核表达

文献来源: 第二军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的:明确胶质细胞生长因子—2(GGF2)在颅脑损伤恢复中的作用,探讨颅脑损伤后GGF2转基因治疗的可行性,原核表达并纯化GGF2重组蛋白。方法:1、原位杂交方法明确GGF2及其受体erbB2、erbB3和erbB4 mRNA在成年雄性SD大鼠侧方液压打击(LFP)脑损伤后脑组织中的变化规律。2、研究大鼠LFP脑损伤后阳离子脂质体介导GGF2转基因治疗对伤后行为学的改善效果。3、重组GGF2的原核表达、纯化。结果:1、大鼠LFP致伤后3—7天,GGF2 mRNA在海马CAl区、CA2区、CA3区、DG及皮层表达明显增加。2、阳离子脂质体介导GGF2转基因治疗可促进大鼠伤后行为学的恢复,可促进损伤区神经元及少突胶质细胞的存活。3、原核表达方法得到GGF2重组蛋白。结论:GGF2在颅脑损伤后有神经营养作用,阳离子脂质体介导GGF2转基因治疗颅脑损伤有临床应用前途,得到GGF2重组蛋白。

论文目录:

中英文对照表

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分大鼠液压脑损伤模型中胶质细胞生长因子—2及其受体mRNA的表达变化

一、材料和方法

(一) 材料

(二) 方法

二、结果

(一) 探针克隆制备

(二) 探针标记

(三) 模型制作

(四) 原位杂交结果分析

三、讨论

(一) GGF2及其受体

(二) 关于PCR

(三) 关于原位杂交

(四) 大鼠LFP脑损伤后GGF2及其受体mRNA表达变化分析

四、结论

第二部分大鼠液压脑损伤后阳离子脂质体介导GGF2转基因治疗

一、材料和方法

(一) 材料

(二) 方法

二、结果

(一) 克隆制作、鉴定

(二) 脂质体／质粒配比的优化，融合蛋白体内表达时相及范围

(三) 行为学观察结果

(四) 组织学、免疫组化结果

三、讨论

(一) 关于LFP模型

(二) 伤后行为学检测方法

(三) 关于基因治疗

(四) GGF2对CNS损伤愈合的促进作用

四、结论

第三部分 GGF2的重组表达、纯化

一、材料和方法

(一)材料

(二)方法

二、结果

(一) 构建成功pET-32b(+)-GGF2表达载体

(二) 宿主菌筛选结果

(三) 诱导剂量及时间优化结果

(四) 大量表达、纯化及鉴定

三、讨论

(一) GGF2基因及分子结构

(二) 表达质粒的构建

(三) 原核表达条件的优化

四、结论

总结及展望

综述

致谢

发布时间: 2006-05-08

参考文献

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