论文摘要
目的:本研究拟通过建立甲基化敏感性高分辨率溶解曲线法（MS- HRM）检测血管内皮生长因子VEGF受体KDR基因启动子区域在不同时期血管瘤、血管畸形及正常皮肤组织等中的甲基化状态,初步探讨基因甲基化在血管瘤形成、增生、退化过程中的作用。方法:选取不同时期血管瘤石蜡标本48例、血管畸形石蜡标本15例、正常包皮皮肤组织标本8例,分别提取DNA,经亚硫酸氢盐甲基化修饰、纯化、回收DNA,以QIAGEN公司的全基因组甲基化DNA作为100%甲基化标准品,与100%非甲基化健康孕妇脐带血DNA按比例混合,稀释制成0%、5%、25%、50%、75%、100%系列浓度甲基化DNA标准品,将甲基化标准品经过PCR扩增后进行MS‐HRM溶解曲线检测获得标准曲线,并进行重复性和灵敏度评价。然后用甲基化敏感性高分辨率溶解曲线法（MS-HRM）定量检测增生期血管瘤24例、消退期血管瘤24例,血管畸形15例,正常包皮皮肤组织8例等标本中血管内皮生长因子受体KDR甲基化水平。结果:成功制成的100%、75%、50%、25%、5%、0%甲基化标准曲线依次从右往左排列,经过三次重复检测,曲线基本重叠一致;经过MS‐HRM检测,48例血管瘤标本共检出32例不同程度KDR基因启动子区域甲基化（66.67%）,其中24例增殖期血管瘤标本中检出21例（21/24,87.50?%）不同程度甲基化,1例甲基化程度为0?%～5%,?11例甲基化为25?%～50%,5例甲基化为75?%,4例甲基化为100%;24例消退期血管瘤标本中检出11例（11/24,45.83?%）不同程度甲基化,其中,1例甲基化程度为75?%,8例甲基化为25?%～50?%,2例甲基化为0%～5%,增殖期血管瘤与消退期血管瘤标本中KDR的甲基化程度比较差异显著,具有统计学意义（χ2=8.889,P<0.05）;15例血管畸形标本中仅检出甲基化程度为0%～25%2例（2/15,13.?33%）,8例正常包皮皮肤组织中检测到1例甲基化0%～5%（1/8,12.50%）。与血管瘤相比,差异均具有统计学意义（P<0.05,Fisher’确切概率法）;消退期血管瘤与血管畸形中KDR的甲基化程度比较有显著差异,具有统计学意义（p=0.45,Fisher’确切概率法）。结论:①血管瘤中血管内皮生长因子受体KDR基因启动子序列CpG岛存在异常甲基化,血管内皮生长因子受体KDR基因异常甲基化可能与血管瘤增生、退化等有关;②MS‐HRM技术定量检测血管瘤中KDR甲基化程度的方法操作简单,灵敏度高,成本低,可重复性强,为进一步研究血管瘤组织中基因异常甲基化建立了一种检测方法。
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标签：血管瘤论文; 血管内皮生长因子受体论文; 甲基化论文;