论文摘要
急性蘑菇中毒事件在我国各地每年均有发生，由于毒蘑菇与食用蘑菇形态相似，很难用肉眼鉴别，易误食，且目前尚无特效解毒药物，所以中毒的危害性较大。近年研究者发现用灵芝煎剂治疗急性蘑菇中毒患者有效，因此设计此动物实验以证实其疗效，并探索其机制，为临床推广打好基础。一、急性鹅膏毒草肝中毒动物模型制作实验目的：1、制作急性鹅膏毒蕈中毒肝损害的动物模型；2、制作的动物模型以满足后续的研究需要。方法：1、鹅膏蕈粗毒素的制备：取40g灰花纹鹅膏干子实体，磨碎后加蒸馏水煮沸，5000r／min离心10分钟取上清液，沉淀物加蒸馏水煮沸后又离心取上清液，两次上清液加在一起加热浓缩，最后定容至最终浓度为40％的粗毒素，即100毫升毒素中含40g灰花纹鹅膏毒菌干子实体。2、取健康新西兰白兔16只，随机分成4组（每组4只），即对照组、实验组Ⅰ、实验组Ⅱ、实验组Ⅲ，分别用生理盐水、灰花纹鹅膏菌粗毒素0.05g／kg、0.1g／kg、0.2g／kg灌胃一次。之后隔日取血样查总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆红素（TBiL）、谷丙转氨酶（ALT），同时记录生存状态，观察120小时后处死，取各组实验动物部分肝组织作病理检查。结果：对照组动物无肝功能生化指标及肝脏病理改变，实验组动物肝功能生化指标均有不同程度的损害，肝脏病理变化为肝细胞不同程度的变性、坏死，汇管区或肝小叶内有炎细胞浸润。结论：1、鹅膏毒蕈毒素对实验兔的肝细胞有明显的损害作用，在一定范围内毒素量与脏器损害程度存在量效关系。制备急性鹅膏毒蕈肝中毒的动物模型可选择新西兰白兔，从胃管内注入灰花纹鹅膏菌粗毒素，剂量为0.1g／kg为宜。二、灵芝煎剂对急性鹅膏毒草中毒兔影响的实验研究目的：1、通过动物实验证明灵芝煎剂对急性鹅膏毒蕈中毒的疗效，主要观察其对实验动物心脏、肝脏、肾脏功能的影响；2、探索灵芝煎剂的解毒机制。方法：1、鹅膏蕈粗毒素的制备：取40g灰花纹鹅膏干子实体，磨碎后加蒸馏水煮沸，5000r／min离心10分钟取上清液，沉淀物加蒸馏水煮沸后又离心取上清液，两次上清液加在一起加热浓缩，最后定容至最终浓度为40％的粗毒素，即100毫升毒素中含40g灰花纹鹅膏毒菌干子实体。2、灵芝煎剂的制备：取2000g赤灵芝干子实体，粉碎（纱布袋包）浸湿加蒸馏水3000ml，煮沸30分钟，然后用4层纱布过滤，再浓缩至2000ml，得生药浓度为100％的灵芝煎剂（即每100ml煎剂含生药100g）。先取500ml备用为灵芝制剂Ⅰ；剩余1500ml再浓缩至500ml，即得300％的灵芝煎剂（即每100ml煎剂含生药300g）备用为灵芝制剂Ⅱ。3、取普通级健康新西兰纯种白兔20只，雌雄各半，年龄约8月，体重约2kg，编号后按随机数字表将其随机分配到以下四组：空白对照组5只，每日用生理盐水10-20ml灌胃；中毒模型组5只，造模后每日用生理盐水20ml灌胃；灵芝煎剂治疗组Ⅰ（简称治疗组Ⅰ）5只，造模后每日用灵芝制剂Ⅰ20ml灌胃；灵芝煎剂治疗组Ⅱ（简称治疗组Ⅱ）5只，造模后每日用灵芝制剂Ⅱ20ml灌胃。对其观察120小时。其间每隔48小时抽血送生化检查，120小时后将其处死，取部分肝脏、肾脏、心脏作病理切片，HE染色后光镜下检查。观察期间死亡者立即解剖，取肝脏、肾脏、心脏组织做病检。取少量肝组织用戊二醛固定后送电镜检查。另取少量肝组织测定RNA聚合酶活性。结果：1、中毒模型组动物的心脏、肝脏、肾脏生化指标及病理改变提示毒素对心脏、肝脏、肾脏有明显损害作用；2、灵芝煎剂治疗组Ⅰ和Ⅱ实验动物的生化指标及各脏器病理改变不明显，其中灵芝煎剂治疗组Ⅱ实验动物比治疗组Ⅰ实验动物心脏、肝脏、肾脏的损害更轻；3、中毒模型组实验动物的肝细胞RNA聚合酶活性明显减退；4、灵芝煎剂治疗组Ⅰ和Ⅱ实验动物的肝细胞RNA聚合酶活性较高。结论：1、灵芝煎剂对急性鹅膏毒蕈中毒兔的肝脏、肾脏、心脏均有明显的保护作用，在一定剂量范围内存在量效关系。2、灵芝煎剂对急性鹅膏毒蕈中毒兔的解毒机理之一是灵芝煎剂使实验兔肝细胞RNA聚合酶的活性恢复或／和提高。