论文摘要
流行性感冒是由流感病毒（influenza virus）感染导致的一种呼吸道疾病,能感染人和多种动物,其特点是短期内突然爆发,迅速流行,具有广泛的破坏性。目前对流感的防治主要是接种流感疫苗。市面上所用的流感疫苗是以鸡胚为生产基质的灭活疫苗,限于鸡胚生产流感疫苗的局限性,开发细胞流感疫苗成为当务之急。荷兰已批准以MDCK细胞为基础而生产的流感疫苗,但目前Vero细胞是WHO积极推荐用于疫苗生产的细胞基质。在流感活疫苗的研制中,冷适应减毒活疫苗因为其优越性而受到重视。本研究以Vero细胞适应的流感病毒株为基础,在25℃进行连续传代以期获得冷适应病毒株,为生产冷适应细胞流感疫苗做相关的准备。第一部分流感病毒在Vero细胞上25℃冷适应的探索本实验将适应Vero细胞的流感病毒毒株在25℃培养,观察病毒培养液中不同TPCK-胰酶浓度、NaHCO3浓度对病毒增殖的影响,筛选出25℃病毒适宜的培养条件。在此培养条件下,采用盲传,33℃正常培养温度回复培养以及病毒混合培养等多种方法,25℃传代培养。传代过程中病毒血凝效价逐代降低,至第7代检测不出血凝效价,因此采用直接将病毒从33℃向25℃适应的方法未能获得病毒冷适应株。第二部分流感病毒在Vero细胞上的梯度冷适应33℃收获的病毒毒种首先在28℃进行适应,待效价稳定并持续获得比较高的效价后将28℃适应的病毒作为毒种。转入25℃进行适应,这种温度梯度的适应使该毒株能够在25℃生长的代次增加,得到一株能够在25℃持续传代15代以上的低水平冷适应的病毒毒株。在25℃培养15代以上后回复33℃培养仍然有很高的效价,表明该毒株还没有温度敏感特征,需要进一步在25℃传代培养。在本试验中,还采用检测病毒M基因的方法来确定病毒的存在。
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