视黄酸及LE540在早期形觉剥夺性近视豚鼠后极部巩膜中的作用

论文摘要

研究目的建立早期形觉剥夺性近视（form-deprivation myopia, FDM）动物模型,检测豚鼠巩膜中视黄酸（retinoic acid, RA）及视黄酸受体β（retinoic acid receptorβ,RARβ）的水平；同时比较注射RARβ特异性抑制剂LE540和注射RA与对照组对屈光状态的影响,观察后极部巩膜病理变化,并检测巩膜基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和核心蛋白聚糖（decorin, DCN）的水平,探讨RA及RARβ在形觉剥夺性近视豚鼠后极部巩膜变化中的作用。方法第一部分：同批次3周龄英国种短毛三色豚鼠30只（中国医学科学院放射研究所动物中心提供）,采用随机数字表法将动物分为3组,正常组6只,形觉剥夺15天组（FD 15 d）和形觉剥夺24天组（FD 24 d）各12只,实验眼均为左眼,右眼为自身对照眼。采用6号同色气球于豚鼠口鼻、双耳及对侧眼处开窗,制成大小合适的头套遮盖左眼,颈部以胶带固定防止脱落,分别饲养至15天和24天作为形觉剥夺动物模型。实验前后均测量屈光度,实验结束后摘除眼球,测量眼轴长,应用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）测定后极部巩膜RA含量,western blotting方法检测巩膜RARβ蛋白含量的变化。第二部分：另选同种豚鼠30只,随机分为4组,Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ组各8只,Ⅳ组6只,为正常对照组。I组左眼球后注射0.1 g/L LE540 0.1ml,并用气球头套遮盖至第24天；II组左眼用气球头套遮盖24天；III组左眼球后注射0.4g/L RA 0.1ml,饲养至第24天。右眼为自身对照眼。实验前后均行视网膜检影测量屈光度,实验结束后取眼球测量眼轴长度,取巩膜做石蜡切片行病理学检查,用western blotting方法检测后巩膜细胞外基质中MMP-2及decorin蛋白含量的变化。计量资料数据以x±s表示,采用SPSS11.5统计学软件进行统计学处理,并进行正态分布及Levene方差齐性检验后行t检验和方差分析。结果第一部分：FD 15 d组、FD 24 d组动物实验眼诱导出明显的相对近视,且与正常组比较差异有统计学意义（F=23.053,P=0.000）。FD15d组、FD 24 d组实验眼眼轴均长于自身对照眼（P<0.05）。FD 15 d组、FD 24 d组实验眼巩膜中RA水平较自身对照眼均明显升高（P<0.01）,但两组实验眼之间比较差异无统计学意义（P=0.857）。Western blotting所得RARβ的灰度图显示,FD 15 d组、FD 24d组实验眼巩膜RARβ较自身对照眼均增多,正常组、FD15 d组和FD 24d组实验眼巩膜中的RARβ/β-actin总体比较差异有统计学意义（F=20.527,P<0.001）,其中FD 15 d组和FD 24 d组实验眼间的RARβ/β-actin比较,差异有统计学意义（t=0.158,P=0.031）,而且FD 15d组和FD 24 d组的实验眼分别与正常组相比,差异均有统计学意义（t=0.324,P<0.001；t=0.482,P<0.001）。第二部分：实验干预后II和III组的实验眼形成相对近视,两组左右眼屈光度差异均有显著统计学意义（t=8.543,P=0.000；t=6.027,P=0.001）。其中,I组和II组实验眼的屈光度在实验前后差异分别为（-1.77±0.93）D和（-5.39±1.26）D,二者之间有显著统计学差异（P=0.000）；III组实验眼干预前后屈光度差别为（-3.73±0.79）D,实验前后差异有统计学意义（t=13.340,P=0.000）。实验干预后I组的左右眼眼轴长度相比差异无显著性统计学意义（t=1.635,P=0.146）；II组和III组干预后左右眼眼轴长度差异均有统计学意义（t=2.980,P=0.021；t=-4.100,P=0.005）。II组和III组实验眼后极部巩膜有明显病理性近视改变。I组、II组和III组实验后实验眼巩膜中的MMP-2/β-actin均明显升高（t=4.520,P=0.020；t=6.913,P=0.006；t=5.462,P=0.012）。I组、II组和III组实验后实验眼巩膜中的Decorin/β-actin均降低,与自身对照眼相比,I组差异无统计学意义（t=2.522,P=0.086）,II组和III组有统计学意义（t=9.072,P=0.003；t=4.202,P=0.025）。结论形觉剥夺可导致轴性近视发生,近视程度在早期随时间明显递增,形觉剥夺眼眼轴增长；豚鼠早期形觉剥夺眼后极部巩膜RA及RARβ水平上调；外源RA可导致轴性近视；形觉剥夺和外源RA诱导的近视眼后极部巩膜中,细胞外基质分解活跃,MMP-2上调,Decorin下调；RA参与介导的形觉剥夺性近视的形成作用可被RARβ抑制剂LE540不完全抑制；RA-RARβ途径可能是导致FDM豚鼠后极部巩膜重塑的重要机制之一

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、视黄酸及RAR β在早期形觉剥夺性近视豚鼠后极部巩膜中的变化
• 1.1 对象和方法
• 1.1.1 主要实验试剂耗材及仪器
• 1.1.2 实验动物及模型制备
• 1.1.3 实验方法
• 1.1.4 统计学分析
• 1.2 结果
• 1.2.1 屈光度变化
• 1.2.2 眼轴变化
• 1.2.3 RA的质量浓度变化
• 1.2.4 RAR β的Western印迹杂交电泳凝胶成像
• 1.3 讨论
• 1.3.1 形觉剥夺动物眼模型
• 1.3.2 视黄酸含量在形觉剥夺性近视眼巩膜中的变化
• 1.3.3 RAR β在形觉剥夺性近视眼巩膜中的变化
• 1.4 小结
• 二、外源性视黄酸及LE540在形觉剥夺性近视豚鼠巩膜中的作用
• 2.1 对象和方法
• 2.1.1 主要实验试剂耗材及仪器
• 2.1.2 实验动物及模型制备
• 2.1.3 实验方法
• 2.1.4 统计学分析
• 2.2 结果
• 2.2.1 屈光度变化
• 2.2.2 眼轴变化
• 2.2.3 后极部巩膜组织病理切片及HE染色
• 2.2.4 MMP-2及Decorin的Western印迹杂交电泳凝胶成像
• 2.3 讨论
• 2.3.1 形觉剥夺、外源性视黄酸与LE540对豚鼠屈光状态影响的比较
• 2.3.2 形觉剥夺性近视眼后极部巩膜的病理学变化
• 2.3.3 MMP-2和Decorin在形觉剥夺性近视动物后巩膜中的变化
• 2.3.4 视黄酸及LE540对形觉剥夺性近视巩膜的影响
• 2.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述 视黄酸在形觉剥夺性近视眼巩膜中作用的研究
• 综述参考文献
• 致谢