ASP的提取分离及对D-半乳糖致衰老小鼠的抗衰老作用

论文摘要

目的:通过略加改进的传统提取方法,从传统补益药当归[Angelica Sinensis（Oliv.）Diels]中,提取分离出当归多糖（Angelica Sinensis polysacchride ASP）,用改良的H2SO4-苯酚法测量ASP含量。再用不同浓度的ASP作用于D-半乳糖所至的亚急性衰老小鼠模型。通过观察小鼠体重、行为学、脑组织与脾脏切片、脾脏指数、脑指数的变化,及测量小鼠血清和脑组织中SOD、MDA、GSH-PX含量和小鼠脑细胞凋亡数,来确定ASP是否具有抗衰老作用及探寻其可能的作用机制,从而为更深入的研究ASP药理作用和研发新型的抗衰老药物提供理论指导和实验依据。方法:①当归多糖的提取和含量测定。本研究在传统提取方法的基础上略进行改进,先用乙醇（Ethanol,EtOH）沉淀ASP,再过滤,80oC水提取,加入饱和氢氧化钙（Calcium hydroxide,C a（OH）2）调节PH到10,过滤,再用乙酸调节滤液PH到4～5,离心过滤,脱色后,减压浓缩滤液为原来1/3。浓缩液中加入乙醇,静置,滤过,沉淀物用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤三次,50oC烘干得到ASP粗当归多糖。采用改良的H2SO4-苯酚法测量ASP含量,测定波长为490nm;②当归多糖对D-半乳糖致衰老小鼠的抗衰老作用。90只昆明小鼠随机分为6组,一组为空白组,另5组每日皮下注射10%D-半乳糖0.25ml/20g,连续40d,其中一组为衰老组,一组为香菇多糖阳性对照组,其余三组为高中低剂量的当归多糖组,实验的第一天开始,每日灌胃香菇多糖和不同剂量的当归多糖进行干预。Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆功能,羟胺法测定小鼠血清和脑组织SOD含量,TBA法测定血清和脑组织MDA含量,采用二硫代二硝基苯甲酸法（DTNB）测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。脾脏和脑组织切片HE染色观察脑细胞形态学变化,TUNEL染色法测定小鼠脑细胞凋亡指数,记录各小鼠脑指数和脾脏指数以及体重变化。结果:①提取的当归多糖的含量结果。用改良的H2SO4-苯酚法测量ASP含量,检测波长为490nm,测得含量为71%;②ASP对D-半乳糖所致亚急性衰老模型小鼠的抗衰老作用检测结果。与模型组比较,通过Morris水迷宫实验和跳台实验,ASP组衰老小鼠学习记忆力较高（p<0.01）;通过羟胺法测得ASP组小鼠血清和脑组织SOD活力明显强于模型组（p<0.05,p<0.01）;TBA法检测出ASP组小鼠血清和脑组织MDA含量明显减少（p<0.05,p<0.01）;二硫代二硝基苯甲酸法（DTNB）测出ASP组血清和脑组织GSH-PX含量得到增加（ p<0.05,p<0.01 ）; ASP组的脾脏指数和脑指数也明显提高（p<0.05,p<0.01）,体重也有了增加;脑平片HE染色观察到ASP组脑细胞变性和坏死情况得到改善;脾脏HE染色观察到ASP组小鼠脾脏淋巴细胞增多;TUNEL染色法测出ASP组脑细胞凋亡指数降低（p<0.05,p<0.01）。结论:在传统提取当归多糖的基础上略加改动得到的ASP粗多糖含量比传统方法得到的当归粗多糖更高,因此对实验结果的影响更加微小。改良的H2SO4-苯酚法测量出的ASP含量也使ASP用量更加精确。抗衰老实验结果表明ASP对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠有一定的抗衰老作用:ASP能提高衰老动物的学习记忆力、增强衰老小鼠体内SOD、GSH-PX活力、减少MDA含量、脾脏指数、脑指数和体重得到提高、脑组织细胞变性坏死情况得到改善、提高小鼠免疫力、降低脑细胞凋亡数。研究提示:当归多糖对于预防和治疗老年病可能具有较好的潜在的开发和应用前景。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 一、中国严峻的老年化问题
• 二、中国的老年化与中国的国情
• 三、中国的老年化与抗衰老药物研制的意义
• 四、当归多糖
• 第一部分 ASP 的提取和含量测定
• 第一节 ASP 的提取
• 第二节 当归多糖的含量测定
• 第二部分 D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠模型的建立
• 第一节 亚急性衰老模型的原理
• 第二节 急性衰老模型的研究与应用
• 第三节 亚急性衰老模型的应用意义
• 第四节 D-半乳糖介绍
• 第五节 本实验的亚急性衰老模型的制作方法及观测指标
• 第三部分 ASP 的抗衰老作用
• 第一节 本课题立足的两大衰老学说
• 第二节 香菇多糖阳性药
• 第三节 抗衰老实验
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位论文期间发表的学术论文目录