白藜芦醇抗动脉粥样硬化作用分子机制的研究

论文摘要

背景:白藜芦醇（Res）是红葡萄酒中具有心血管保护作用的最重要的物质,可通过其强大的抗炎作用发挥抗动脉粥样硬化作用。CD40途径参与了动脉粥样硬化（AS）中主要细胞成分的炎症反应调节,在动脉粥样硬化的各个阶段均发挥着重要作用。目的:研究白藜芦醇对单核细胞趋化相关分子的影响、抗氧化、稳定粥样斑块的作用及其与CD40途径的关系,探讨白藜芦醇抗动脉粥样硬化分子作用机制。方法:将体外培养的单核细胞（THP-1）随即分为:空白组、1μmol/LRes组、10μmol/LRes组、50μmol/LRes组,Res孵育24h后,半定量RT-PCR方法检测单核细胞趋化蛋白受体2（CCR2）基因的表达。用佛波酯醇（PMA）诱导THP-1分化为巨噬细胞（Mφ）。利用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、sCD40L活化体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和巨噬细胞将体外培养的HUVEC和Mφ随机分为五组:空白组、TNF-α（10μg/L）组、TNF-α（10μg/L）+（1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L）Res组或sCD40L（10μg/ml）组、sCD40L（10μg/ml）+（1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L）Res组。药物处理组实验顺序为Res预孵育2h后,加入TNF-α或sCD40L刺激细胞,半定量RT-PCR方法检测Mφ内基质金属蛋白酶-9/组织基质金属蛋白酶抑制因子-1（MMP-9/TIMP-1）基因的转录水平,Western Blot、明胶酶谱法检测MMP-9/ TIMP-1蛋白表达水平和酶活性,ELISA测HUVEC单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的分泌,免疫荧光法检测HUVEC内活性氧簇（ROS）的表达。结果:白藜芦醇（10μmol/L、50μmol/L）可以剂量依赖地减少单核细胞CCR2基因的表达（P<0.01）。TNF-α和sCD40L均可刺激HUVEC MCP-1分泌和ROS表达增加（P<0.05）,而白藜芦醇（10μmol/L、50μmol/L）可抑制TNF-α和sCD40L活化HUVEC MCP-1的分泌（P<0.05）和细胞内ROS的产生（P<0.01）。PMA诱导THP-1分化为巨噬细胞后,巨噬细胞内MMP-9/TIMP-1基因转录、蛋白分泌明显增加（P<0.01）,白藜芦醇（10μmol/L、50μmol/L）可以并且以剂量依赖的方式抑制sCD40L刺激巨噬细胞MMP-9基因、蛋白的表达（P<0.01）,降低MMP-9酶活性（P<0.05）;并能够逐渐升高巨噬细胞TIMP-1基因的转录（P<0.05）和蛋白分泌（P<0.05）。结论:白藜芦醇可抑制单核细胞CCR2基因的表达和减少TNF-α或sCD40L诱导的HUVEC MCP-1的分泌,抑制对单核细胞的趋化;还可抑制活化的HUVEC内ROS的产生,减少内皮氧化损伤。白藜芦醇可以通过CD40途径抑制巨噬细胞内MMP-9的表达,并通过刺激TIMP-1的表达调节MMP-9的活性。提示白藜芦醇可通过阻断CD40途径而抑制AS早期的炎症反应,具有保护血管内皮和稳定粥样斑块的作用。

论文目录

• 中英文简写对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 白藜芦醇对人单核细胞趋化相关分子和内皮细胞内ROS 的影响
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 白藜芦醇对巨噬细胞MMP-9/TIMP-1的影响作用
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 总结
• 参考文献
• 致谢
• 综述