增强化学发光酶联免疫分析新体系的研究及应用

论文摘要

本论文的工作主要是研究了两种酚类化合物4-（1,2,4-三氮唑-1-基）苯酚（TRP）和4-羟基-4-碘-联苯（HIOP）对Luminol-H2O2-HRP化学发光体系的增强作用以及探讨建立的新型增强化学发光酶联免疫分析体系的应用。本文的具体工作如下:（1）建立了以TRP为增强剂的Luminol-H2O2-HRP-TRP增强化学发光新体系,优化了体系的各项影响因素如反应物（鲁米诺、增强剂、H2O2）的浓度、表面活性剂、缓冲溶液。在选定条件下,化学发光强度值与HRP的浓度在2.0×10-94×10-8g/mL内呈良好线性关系,检测限为5.0×10-10 g/mL。与经典的增强剂对碘苯酚相比,TRP增强化学发光效果较好,可应用于过氧化氢传感器的研究。（2）以HIOP为增强剂建立Luminol-H2O2-HRP-HIOP增强化学发光新体系,对体系的各项影响因素如测定时间、反应物（鲁米诺、增强剂、H2O2）的浓度、增强剂的溶剂进行了优化。在选定条件下,测定了HRP的工作曲线及检测限,分别为5.0×10-11 4×10-8 g/mL和9.0×10-12 g/mL。与经典的化学发光酶联免疫体系Luminol-H2O2-HRP-IOP对HRP的测定相比,检测限低两个数量级,并且线性范围也拓宽了一个数量级。以上证明新体系可以应用于化学发光酶联免疫分析中,用于肿瘤标志物的检测。对新体系的发光机理进行了初步探讨。（3）高灵敏度的Luminol-H2O2-HRP-HIOP化学发光酶联免疫分析新体系和具有高效分离特点的磁性微球相结合,建立一种快速、灵敏、的化学发光免疫检测方法,应用于对甲胎蛋白抗原的检测。新方法测定甲胎蛋白抗原浓度的线性范围为1.0150 ng/mL,相关系数0.9993,检测限为0.5 ng/mL。与常用的ELISA法相比,灵敏度提高了10倍。通过对人体血清样品的分析,得出结果具有良好的相关性。（4）将上述新免疫检测新方法应用于对癌胚抗原（CEA）的检测。该方法测定CEA抗原浓度的线性范围为0.540.0 ng/mL,相关系数为0.9989,检测限为0.5 ng/mL。与常用的ELISA法相比,灵敏度提高了10倍。并且测定人体血清样品结果显示具有良好的相关性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 前言
• 1.1 化学发光分析法
• 1.1.1 化学发光概述
• 1.1.2 化学发光基本原理
• 1.1.3 常见的化学发光反应体系
• 1.1.3.1 鲁米诺化学发光反应体系
• 1.1.3.2 光泽精化学发光反应体系
• 1.1.3.3 高锰酸钾化学发光反应体系
• 1.1.3.4 过氧草酸酯类化学发光反应体系
• 1.1.3.5 其他化学发光法
• 1.2 化学发光酶联免疫分析
• 1.2.1 免疫分析概述
• 1.2.1.1 概述
• 1.2.1.2 抗原和抗体的定义
• 1.2.1.3 抗原-抗体结合反应
• 1.2.1.4 抗原-抗体结合反应的原理
• 1.2.1.5 抗原-抗体结合反应的特点
• 1.2.2 标记免疫分析
• 1.2.3 酶联免疫分析
• 1.2.4 化学发光酶联免疫分析
• 1.3 增强化学发光酶联免疫分析
• 1.3.1 概述
• 1.3.2 增强化学发光体系
• 1.3.2.1 以鲁米诺及其衍生物为发光剂的增强化学发光体系
• 1.3.2.2 以磷酸化金刚烷环氧化物为发光剂的增强化学发光体系
• 1.4 增强鲁米诺化学发光免疫分析研究进展
• 1.5 增强化学发光免疫分析的展望
• 2O₂-HRP-4-（1,-2,-4-三氮唑-1-基）苯酚增强化学发光新体系的研究'>第2章 Luminol-H₂O₂-HRP-4-（1,-2,-4-三氮唑-1-基）苯酚增强化学发光新体系的研究
• 2.1 实验部分
• 2.1.1 仪器与试剂
• 2.1.2 溶液
• 2.1.3 实验方法
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 增强剂TRP 的溶剂的影响
• 2.2.2 增强剂4-（1,2,4-三氮唑-1-基）苯酚浓度的影响
• 2.2.3 鲁米诺浓度的影响
• 2.2.4 体系缓冲溶液pH 值的影响
• 2O₂ 浓度的影响'>2.2.5 H₂O₂浓度的影响
• 2.2.6 HRP 工作曲线及检测限的测定
• 2.2.7 TRP 与对碘苯酚的增强效果比较
• 2.3 小结
• 2O₂-HRP-4-羟基-4′-碘-联苯增强化学发光新体系的研究'>第3章 Luminol-H₂O₂-HRP-4-羟基-4′-碘-联苯增强化学发光新体系的研究
• 3.1 实验部分
• 3.1.1 仪器与试剂
• 3.1.2 实验方法
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 HIOP 溶剂及表面活性剂的影响
• 3.2.2 HIOP 浓度的影响
• 3.2.3 HRP 溶剂的pH 值的影响
• 3.2.4 鲁米诺浓度的影响
• 3.2.5 鲁米诺溶液pH 值的影响
• 2O₂ 浓度的影响'>3.2.6 H₂O₂浓度的影响
• 3.2.7 HRP 的工作曲线及检测限的测定
• *-碘-联苯（HIOP）的增强效果比较'>3.2.8 对碘苯酚（IOP）和4-羟基-4^*-碘-联苯（HIOP）的增强效果比较
• 2O₂-HRP-HIOP 的化学发光反应机理'>3.2.9 Luminol-H₂O₂-HRP-HIOP 的化学发光反应机理
• 3.3 小结
• 2O₂-HRP-HIOP 增强化学发光酶联免疫体系测定人血清甲胎蛋白'>第4章 Luminol-H₂O₂-HRP-HIOP 增强化学发光酶联免疫体系测定人血清甲胎蛋白
• 4.1 概述
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 仪器与试剂
• 4.2.2 实验方法
• 4.2.2.1 羧基修饰磁珠的表征
• 4.2.2.2 磁珠表面甲胎蛋白抗体的偶联
• 4.2.2.3 增强化学发光酶联免疫分析测定α-AFP
• 4.2.2.4 ELISA 法测定α-AFP
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 羧基修饰的磁珠SEM 表征
• 4.3.2 甲胎蛋白HRP 标记物的测定
• 4.3.3 甲胎蛋白抗原的线性检测范围和检测限
• 4.3.4 血清样品分析
• 2O₂-HRP-HIOP 增强化学发光酶联免疫体系测定癌胚抗原'>第5章 Luminol-H₂O₂-HRP-HIOP 增强化学发光酶联免疫体系测定癌胚抗原
• 5.1 概述
• 5.2 实验部分
• 5.2.1 仪器与试剂
• 5.2.2 实验方法
• 5.2.2.1 磁珠表面癌胚抗原的偶联
• 5.2.2.2 增强化学发光酶联免疫测定CEA 抗原
• 5.2.2.3 ELISA 法测定CEA 抗原
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 癌胚抗原HRP 标记物的测定
• 5.3.2 CEA 抗原线性范围和检测限
• 5.3.3 血清样品分析
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文