论文摘要
本研究以初生、30、60、70日龄、90日龄的小梅山猪母猪和初生、60、120、150日龄、180日龄的苏姜猪母猪为研究对象,目的是通过免疫组化技术和荧光定量PCR技术,把与初情期有关的基因KISS-1 mRNA在下丘脑、垂体和卵巢的分布定位及发育性表达变化联系起来,探索这个基因在初情期启动机制中的作用,为阐明动物生殖机理和早熟品种选种选育提供理论基础。结果如下:1.用免疫组化技术检测KISS-1 mRNA在下丘脑、垂体和卵巢的分布定位。在小梅山母猪和苏姜母猪五个不同发育日龄的下丘脑、垂体和卵巢三种组织中,均检测到KISS-1 mRNA阳性颗粒,表明小梅山母猪和苏姜母猪五个不同发育阶段的三种组织中均有KISS-1 mRNA表达。其中下丘脑在初情期时阳性颗粒最多;各级卵泡中以初情期时成熟卵泡的阳性颗粒最多。2.放射免疫测定（RIA）五个日龄血浆FSH、LH、E2、P4浓度变化规律。结果表明:小梅山母猪和苏姜猪母血浆LH、FSH、E2浓度变化的趋势大体一致,均为初生时有较高的水平,随后迅速下降,初情期前（小梅山母猪60日龄,苏姜母猪120日龄）开始升高,至初情期时达到一个峰值。P4在初生时浓度较低,在达到高峰期之前,P4的浓度比较平稳,变化不显著（P>0.05）。3.用荧光定量PCR技术检测小梅山母猪和苏姜母猪五个不同发育日龄的下丘脑、垂体和卵巢三种组织中KISS-1 mRNA的表达丰度变化。结果显示:下丘脑、垂体和卵巢三种组织中KISS-1 mRNA的表达量均在初情期最高;小梅山猪KISS-1 mRNA表达量从初生到初情期表达量逐渐上升,初情期后呈下降趋势;苏姜猪KISS-1 mRNA表达量的变化趋势同小梅山猪,从初生到初情期表达量逐渐上升,初情期后呈下降趋势,但是苏姜母猪卵巢五个不同发育阶段KISS-1 mRNA表达量变化比小梅山母猪卵巢KISS-1 mRNA表达量的变化幅度小,但各器官间存在差异。小梅山母猪下丘脑与卵巢Kiss-1 mRNA表达量差异不显著（P>0.05）,但两者与垂体均存在显著差异（P<0.05）。而苏姜猪不同发育阶段期间在下丘脑分别与垂体、卵巢KISS-1 mRNA的表达量差异不显著（P>0.05）;而垂体与卵巢的表达丰度差异显著（P<0.05）。总之,本研究探讨了KISS-1基因与母猪初情期启动的关系,测定了KISS-1 mRNA在小梅山母猪和苏姜母猪下丘脑-垂体-卵巢中的定位和初情期前后的表达规律以及不同发育阶段激素水平的变化,结果显示:不同发育阶段KISS-1 mRNA在HPG中的杂交信号、表达丰度的变化与激素水平变化一致,表明:证实了KISS-1基因是猪初情期启动的关键基因。