乳腺特异表达人血小板生成素基因载体的研究

乳腺特异表达人血小板生成素基因载体的研究

论文摘要

人血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是体内调节血小板生成的首要调节因子,它可以特异性提高体内血小板的水平,预防和治疗由于放化疗引起的血小板减少症及原发性血小板减少性紫癜。最新研究还发现,TPO作为一种细胞调节因子可以促进造血干细胞的增长。本研究的最终目的和意义是:为了制备乳汁中高效表达人血小板生成素的转基因克隆牛,构建不同启动子引导的TPO真核表达载体,使其在乳腺特异表达,并分别在细胞水平和个体水平检测TPO表达量,同时为TPO及启动子等基因表达调控提供科学数据。研究和实验方法:构建三个乳腺特异表达载体pB3.9T、pB1.9T和pPT,通过瞬间转染及稳定整合后,在转录及翻译水平检测TPO表达。结果显示,首先,本实验选用的长约1.3kb的TPO minigene经转录后可以正确地剪切,并翻译合成人TPO。其次,BLG3.9、BLG1.9和P1A3三种调控元件都可以启动人TPO在乳腺细胞中特异表达。第三,pB3.9T表达量要明显高于pB1.9T。第四,当表达载体稳定整合入细胞基因组,TPO表达量呈稳步上升趋势,并且要高于瞬时转染的表达量。第五,在瞬时转染及稳定转染早期,P1A3启动子调控的TPO真核表达载体的表达水平要明显高于BLG3.9和BLG1.9启动子调控的TPO真核表达载体。但随着时间推移,细胞数目不断地增加,pB3.9T却远远超过了pPT。第六,获得稳定整合了三种载体的单克隆成纤维细胞系。我们可以得出以下结论,第一,山羊β-乳球蛋白基因和β-酪蛋白启动子都能够指导TPO在乳腺细胞中特异表达。第二,在BLG基因5’端启动子上游-3.9kb至-1.9kb区域内可能含有特殊的增强序列。第三,随着细胞的不断增值,BLG3.9启动子可能激活了某种增强机制,或削弱了某种抑制机制。第四,证实了BLG转录子去阻遏和激活调节转变机制的存在,初步推论极有可能在BLG基因5’端上游-3.9kb至-1.9kb之间存在这一调节区域。第五,本研究构建的三个载体均可以用来制备转基因动物,并且可以为克隆牛提供转基因核供体细胞系。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 引言
  • 引言参考文献
  • 1 乳腺特异表达载体的构建和鉴定
  • 1.1 δpcDNA3.1(+)-BLG1.9-TPO-neo 真核表达载体的构建和鉴定
  • 1.2 δpcDNA3.1(-)-BLG3.9-TPO-neo 真核表达载体的构建和鉴定
  • 1.3 δpcDNA3.1(-)-P1A3-TPO-neo 真核表达载体的构建和鉴定
  • 参考文献
  • 2 乳腺特异表达载体的瞬时转染及检测
  • 2.1 乳腺特异表达载体在HC-11 细胞株瞬时转染
  • 2.2 乳腺特异表达载体在小鼠乳腺瞬时转染
  • 参考文献
  • 3 乳腺特异表达载体的稳定整合及检测
  • 3.1 乳腺特异表达载体在HC-11 细胞株稳定整合和筛选
  • 3.2 乳腺特异表达载体在牛耳成纤维细胞中稳定整合和筛选
  • 参考文献
  • 小结
  • 附录1
  • 附录2
  • 致谢
  • 攻读学位期间发表的学术文章
  • 上海交通大学学位论文评阅人及答辩委员审批表
  • 相关论文文献

    • [1].大剂量地塞米松联合重组人促血小板生成素治疗重症免疫性血小板减少症疗效分析[J]. 中国医学工程 2019(11)
    • [2].地塞米松联合重组人血小板生成素治疗成人免疫性血小板减少症的临床效果[J]. 中国当代医药 2019(35)
    • [3].重组人促血小板生成素治疗急性白血病化疗后血小板减少症的疗效[J]. 中国医药指南 2019(33)
    • [4].重组人血小板生成素治疗非霍奇金淋巴瘤化疗后血小板减少的疗效观察[J]. 临床医药文献电子杂志 2019(97)
    • [5].重组人血小板生成素治疗急性白血病化疗后血小板减少症的疗效分析[J]. 临床医药文献电子杂志 2020(01)
    • [6].重组人促血小板生成素治疗实体瘤化疗所致血小板减少的效果观察[J]. 当代医学 2019(36)
    • [7].联合应用重组人血小板生成素安全有效治疗婴幼儿重症原发免疫性血小板减少症——单中心数据分析[J]. 临床血液学杂志 2020(02)
    • [8].艾曲波帕联合重组人血小板生成素治疗难治性血小板减少性紫癜的疗效分析[J]. 中外医疗 2020(02)
    • [9].重组人血小板生成素治疗非霍奇金淋巴瘤化疗后血小板减少的临床分析[J]. 血栓与止血学 2020(01)
    • [10].艾曲泊帕乙醇胺片联合重组人血小板生成素注射液治疗血小板减少症患者的临床研究[J]. 中国临床药理学杂志 2020(07)
    • [11].重组人血小板生成素治疗难治性原发免疫性血小板减少症的临床研究[J]. 中国实用医药 2020(16)
    • [12].转移因子口服液联合重组人血小板生成素治疗儿童特发性血小板减少性紫癜的临床研究[J]. 现代药物与临床 2020(06)
    • [13].重组人血小板生成素联合地塞米松治疗初诊免疫性血小板减少症临床疗效分析[J]. 内蒙古医学杂志 2020(05)
    • [14].重组人促血小板生成素对白血病化疗后血小板减少症的疗效研究[J]. 血栓与止血学 2020(04)
    • [15].重组人血小板生成素治疗特发性血小板减少性紫癜临床观察[J]. 深圳中西医结合杂志 2020(14)
    • [16].重组人血小板生成素治疗创伤并发严重血小板减少症初步疗效观察[J]. 内科理论与实践 2020(04)
    • [17].重组人血小板生成素治疗儿童免疫性血小板减少性紫癜效果分析[J]. 中国现代医药杂志 2019(11)
    • [18].重组人血小板生成素治疗慢性难治性免疫性血小板减少性紫癜的临床价值[J]. 中国卫生标准管理 2018(04)
    • [19].血小板生成素的发现及应用[J]. 中国小儿血液与肿瘤杂志 2018(04)
    • [20].重组人血小板生成素预防吉西他滨化疗相关血小板减少症的临床观察[J]. 癌症进展 2016(10)
    • [21].重组人血小板生成素在中国治疗原发免疫性血小板减少症的预算影响分析[J]. 中国医疗保险 2017(02)
    • [22].重组人血小板生成素治疗特发性血小板减少性紫癜临床观察[J]. 内蒙古医学杂志 2016(10)
    • [23].重组人血小板生成素治疗胃癌患者化疗后血小板降低的临床观察[J]. 内蒙古医学杂志 2016(10)
    • [24].重组人血小板生成素治疗化疗后血小板减少的临床观察[J]. 临床医药文献电子杂志 2016(40)
    • [25].重组人血小板生成素治疗免疫性血小板减少症的效果分析及对炎症因子的调控作用研究[J]. 临床和实验医学杂志 2017(08)
    • [26].重组人血小板生成素联合地塞米松治疗原发免疫性血小板减少症的疗效探讨[J]. 中国实用医药 2017(09)
    • [27].重组人血小板生成素治疗成人急性髓系白血病化疗后血小板减少的临床疗效[J]. 实用医学杂志 2017(16)
    • [28].升血小板胶囊联合重组人血小板生成素治疗特发性血小板减少性紫癜的疗效观察[J]. 现代药物与临床 2017(08)
    • [29].重组人血小板生成素与人血丙种球蛋白治疗难治性血小板减少性紫癜[J]. 中国现代药物应用 2017(16)
    • [30].重组人血小板生成素治疗免疫性血小板减少症的疗效及安全性观察[J]. 中国民康医学 2017(12)

    标签:;  ;  ;  ;  ;  ;  

    乳腺特异表达人血小板生成素基因载体的研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢