乙肝病毒RNA复制子疫苗、DNA疫苗的构建及其对小鼠免疫效果的比较

论文摘要

本研究的目的是构建乙肝病毒的RNA 复制子疫苗,通过与普通疫苗和DNA 疫苗进行比较,探索RNA 复制子疫苗最佳的形式和免疫途径。首先,充分利用生物信息学工具及多条重叠引物PCR 拼接的策略,设计并合成了两个抗原基因:S2-S 和MAG。将两种抗原基因的PCR产物分别与pGEM-T 载体连接,并筛选到序列正确的克隆质粒pGEM-S2S 和pGEM-MAG。本研究利用S2-S、MAG 作为两个抗原基因,以IL-2 为分子佐剂,利用pcDNA3.1+构建DNA疫苗,利用RNA复制子载体pSFV构建RNA复制子疫苗,共构建8个疫苗载体:pSFV-S2S,pSFV-MAG,pcDNA-S2S,pcDNA-MAG,pSFV-S2S-II-IL2,pSFV-MAG-II-IL2,pcDNA-S2S-II-IL2,pcDNA-MAG-II-IL2。其中II 是本研究中从载体pIRES1neo 上扩增IVS和IRES 的片段（本研究中通称为II）。将上述八个疫苗载体分别转染BHK-21 细胞,ELISA 检测其表达情况,结果表明以RNA 复制子疫苗载体的表达效率高于DNA 疫苗。另外,RNA 复制子疫苗载体转染BHK-21 细胞后,细胞呈现凋亡特征。将所构建的疫苗载体以不同的剂量分三次免疫BALB/c 小鼠,ELISA检测体液免疫效果。建立稳定表达S2S 和MAG 的P815 细胞作为CTL检测的靶细胞,通过CTL 方法检测细胞免疫效果。结果表明,RNA 复制子疫苗体液免疫和细胞免疫效果均优于DNA 疫苗,但二者的体液免疫效果不及基因工程亚单位疫苗。

论文目录

• 第一篇 文献综述
• 第一章 乙肝病毒分子生物学特征及其疫苗研究进展
• 第二章 RNA 复制子疫苗研究进展
• 第二篇 研究内容
• 第一章 乙肝病毒抗原基因52-S、MAG 的设计、拼接与克隆
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 HBV RNA 复制子疫苗及DNA 疫苗载体的构建
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 HBV RNA 复制子疫苗、DNA 疫苗在BHK-21 细胞中表达情况检测及其对小鼠免疫效果的比较
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 中英文摘要