论文摘要
Munc-18是一种67kDa的突触前膜胞内蛋白,在突触囊泡释放过程发挥重要的调节作用。从Rasmussen’s脑炎患儿血清中检测到抗Munc-18自身抗体后,对这种自身抗体功能的研究陆续开展,本室的前期研究显示抗Munc-18抗体对SD大鼠有致痫作用,但其致痫机制仍不明确。对Munc-18抗原来源和Munc-18抗体其他功能的研究尚未见报道,我们在原代培养的皮层神经元和SD大鼠上对这两方面进行初步研究。主要研究结果如下：1.沉淀正常原代培养皮层神经元生长培养液中的蛋白,进行western blot检测发现Munc-18可以进入细胞外液；活细胞免疫荧光染色显示Munc-18分布在细胞表面和神经突起末梢；免疫电镜观察显示正常和海人藻酸诱导的癫痫SD大鼠海马,Munc-18分布在细胞间隙和突触间隙。2.在50μM谷氨酸刺激原代培养的皮层神经元兴奋后,用细胞表面生物素化技术标记神经元细胞表面蛋白,western blot险测发现用亲和素分离的生物素化胞膜表面蛋白中Munc-18明显增多,进入细胞外液的Munc-18也随之增加,而此时神经元LDH释放水平并没有增加；随谷氨酸作用时间的延长,细胞外液中的Munc-18又逐渐减少同时免疫细胞荧光染色显示Munc-18在更广泛的神经突起及其末梢部位分布。3.在原代培养的皮层神经元,1：1000的anti-Munc-18 N terminal抗体作用1小时对Munc-18进入细胞外液有明显的促进作用,此时神经元LDH释放水平并没有增加。4.30mM KCl刺激皮层神经元兴奋15分钟时细胞膜表面Munc-18明显增加,随时间延长至45分钟,细胞表面的含量逐渐下降。5.1：100～1：800的识别Munc-18氨基末端的抗体可抑制30mM KCl诱发突触小体释放谷氨酸活动；Munc-18氨基末端抗体不影响突触小体内钙离子浓度；钙离子不影响KCl刺激下突触小体胞膜表面Munc-18的含量。我们认为Munc-18分布在细胞膜表面,跨越细胞膜并进入细胞外液可能成为自身免疫应答的抗原来源,抗Munc-18抗体对谷氨酸释放的抑制作用可能导致中枢神经系统内神经递质失衡,产生致痫效应。