本文主要研究内容
作者左锐,林峻,蔡伟文（2019）在《T4多聚核苷酸激酶的原核表达、纯化及初步应用》一文中研究指出：原核表达、纯化T4多聚核苷酸激酶,并尝试将纯化的T4 PNK用于短探针序列的连接。本研究以合成的pseT基因为模板,PCR扩增出带有NdeⅠ和Bam HⅠ位点的目的片段,构建pseT-pET-15b原核表达载体,并转入E. coli ER2566中诱导表达。Ni-Agarose亲和层析柱纯化重组蛋白后,再进行Western blot鉴定。用纯化后再浓缩的T4 PNK参与探针连接反应,并设置商品T4 PNK和阴性对照。PCR扩增成功获得大于900 bp的目的基因片段,原核表达载体pseT-pET-15b构建成功,经诱导表达的重组蛋白分子量大小约为35 kD,Western blotting确认蛋白表达正确,浓缩后的蛋白浓度达到826μg/m L。电泳结果显示,重组T4 PNK在探针连接中效果较好。本研究成功表达并纯化了可溶性的T4多聚核苷酸激酶,且具有较好的活性,该蛋白可进一步用于后续大批量探针连接反应或其他相关研究,具有一定实际应用价值。
Abstract
yuan he biao da 、chun hua T4duo ju he gan suan ji mei ,bing chang shi jiang chun hua de T4 PNKyong yu duan tan zhen xu lie de lian jie 。ben yan jiu yi ge cheng de pseTji yin wei mo ban ,PCRkuo zeng chu dai you NdeⅠhe Bam HⅠwei dian de mu de pian duan ,gou jian pseT-pET-15byuan he biao da zai ti ,bing zhuai ru E. coli ER2566zhong you dao biao da 。Ni-Agaroseqin he ceng xi zhu chun hua chong zu dan bai hou ,zai jin hang Western blotjian ding 。yong chun hua hou zai nong su de T4 PNKcan yu tan zhen lian jie fan ying ,bing she zhi shang pin T4 PNKhe yin xing dui zhao 。PCRkuo zeng cheng gong huo de da yu 900 bpde mu de ji yin pian duan ,yuan he biao da zai ti pseT-pET-15bgou jian cheng gong ,jing you dao biao da de chong zu dan bai fen zi liang da xiao yao wei 35 kD,Western blottingque ren dan bai biao da zheng que ,nong su hou de dan bai nong du da dao 826μg/m L。dian yong jie guo xian shi ,chong zu T4 PNKzai tan zhen lian jie zhong xiao guo jiao hao 。ben yan jiu cheng gong biao da bing chun hua le ke rong xing de T4duo ju he gan suan ji mei ,ju ju you jiao hao de huo xing ,gai dan bai ke jin yi bu yong yu hou xu da pi liang tan zhen lian jie fan ying huo ji ta xiang guan yan jiu ,ju you yi ding shi ji ying yong jia zhi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自基因组学与应用生物学的左锐,林峻,蔡伟文，发表于刊物基因组学与应用生物学2019年01期论文，是一篇关于多聚核苷酸激酶论文,基因论文,原核表达论文,探针连接论文,基因组学与应用生物学2019年01期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自基因组学与应用生物学2019年01期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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