论文摘要
目的：探讨miR-195调控LATS2对BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：MicroRNA（miRNA）芯片分析BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞miRNA的表达差异，靶基因预测软件分析与LATS2基因相互作用的miRNA，筛选出miR-195为目的miRNA。将miR-195质粒载体及其阴性对照质粒瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞；荧光素酶报告基因实验验证miR-195调控的靶基因；倒置荧光显微镜和实时定量RT-PCR检测转染效率；MTT检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡率；实时定量RT-PCR检测mRNA水平，Western blot检测蛋白表达水平。结果：基因芯片检测结果表明下调两倍的miRNA有：miR-195，miR-18a，miR-122等，BEL-7402/5-FU比BEL-7402上调两倍的miRNA有：miR-18和miR-224；结合芯片结果及利用生物信息学筛选出miR-195作为研究对象；倒置荧光显微镜和实时定量RT-PCR检测，结果表明在miR-195转染的BEL-7402/5-FU细胞中miR-195表达水平显著升高，MTT检测结果显示miR-195转染组的细胞生长指数较miRNA阴性对照组和未转染对照组明显降低；流式细胞仪检测miR-195转染组凋亡率较miRNA阴性对照组和未转染组增加；实时定量RT-PCR检测表明，miR-195转染组较miRNA阴性对照组和未转染组LATS2、P53的mRNA表达水平升高，CDK2的mRNA表达水平降低；Western blot检测，LATS2、P53蛋白表达水平升高，CDK2蛋白表达水平降低；双荧光素酶活性检测验证miR-195通过靶向作用LATS23’UTR对其表达进行负调控。结论：1、miR-195能够促进BEL-7402/5-FU细胞凋亡。2、miR-195能够上调BEL-7402/5-FU细胞中LATS2、P53蛋白的表达，下调CDK2蛋白表达。3、miR-195可通过靶向调控LATS2促进BEL-7402/5-FU细胞凋亡。
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