文蛤弧菌病的病原生物学研究及组织病理观察

论文摘要

对江苏吕泗发病文蛤的组织病理学进行了初步研究,结果发现病蛤的外套膜、鳃、足和闭壳肌等组织都发生了不同程度的组织病理学变化,并随着病程的发展逐渐严重,主要表现为外套膜、鳃、足和闭壳肌等上皮细胞肿胀、破裂或脱落,结缔组织增生或溶解,血淋巴细胞增多,肌纤维结构松散、断裂,组织中嗜碱性细胞增多,鳃组织发生坏死崩解。从江苏吕泗文蛤养殖区发病文蛤和养殖水体中分离到5株菌株（病蛤中分离到3株,养殖水体中分离到2株）。人工感染实验结果显示,菌株WG1702能引起供试文蛤发病,死亡率为100%,且发病症状与原发病症状相同,提示该菌株是引起文蛤大面积死亡的主要致病菌。对其形态、生理生化特征、分类地位及致病性进行了初步研究,菌株WG1702直杆状,革兰氏染色阴性,菌落不透明,边缘平整,黄色,生长48小时后变为绿色,无臭味,生理生化指标为赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、硝酸盐还原、甘露糖、氧化酶、甲基红阳性,精氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、水杨素、V.P阴性。为进一步鉴定该菌株,进行了16 S rRNA分子鉴定,PCR扩增获得了大小约1.5 kb的16 S rRNA部分片段,对其序列进行了测定,并进行同源性分析和系统进化树构建。结果表明,该菌株与哈氏弧菌（DQ146937）同源性最高,为97.4%,结合形态及生理生化结果,确定菌株WG1702为哈氏弧菌（Vibrio harveyi）。药敏试验结果表明,菌株WG1702对阿米卡星、复方新诺明、卡那霉素、菌必治、先锋必、链霉素、庆大霉素、新霉素、头孢拉定9种药物高度敏感,对氟哌酸、利福平、头孢噻吩、头孢氨苄、氨苄青霉素5种药物中度敏感,对四环素、青霉素G低度敏感。菌株WG1702的培养条件优化实验结果表明,菌株WG1702培养32 h时达到生长最高峰,最佳温度为28℃,最佳pH为7.0,最佳盐度为40,最佳装液量为60 mL/150 mL,促进生长的离子是NH4+、Fe2+、Fe3+,抑制生长的离子是Cu2+、Mn2+,菌株WG1702最佳C源为葡萄糖、N源为蛋白胨。pH、温度、不同菌龄正交实验证明最佳组合为pH 7.1,温度28℃,菌龄24 h,方差分析结果显示三因素中pH对生长影响最显著（P<0.05）,各因素对菌体生长的影响程度为pH>菌龄>温度。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 文献综述
• 1 引言
• 1.1 本研究的实用价值和理论意义
• 1.2 国内外养殖与研究现状
• 1.3 本研究拟解决的问题
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 材料及其来源
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 主要溶液和试剂
• 2.1.4 主要使用的仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 病原菌鉴定
• 2.2.2 药物敏感性试验
• 2.2.3 人工感染试验
• 2.2.4 病原菌培养条件优化
• 2.2.5 组织病理学试验
• 3 结果与分析
• 3.1 病原菌鉴定结果
• 3.1.1 病原菌形态特征
• 3.1.2 病原菌生理生化特性
• 3.1.3 分子生物学鉴定结果
• 3.2 药物敏感性试验结果
• 3.3 人工感染试验结果
• 3.4 培养条件优化试验结果
• 3.4.1 培养时间对哈氏弧菌WG1702 生长的影响
• 3.4.2 培养温度对哈氏弧菌WG1702 生长的影响
• 3.4.3 起始pH 对哈氏弧菌WG1702 生长的影响
• 3.4.4 盐度对哈氏弧菌WG1702 生长的影响
• 3.4.5 装液量对哈氏弧菌WG1702 生长的影响
• 3.4.6 不同离子对哈氏弧菌WG1702 生长的影响
• 3.4.7 C、N 源对哈氏弧菌WG1702 生长的影响
• 3.4.8 pH、温度、不同菌龄三因子正交试验结果
• 3.5 病理切片观察
• 4 讨论
• 4.1 病原菌鉴定
• 4.2 药敏实验结果
• 4.3 培养条件优化
• 4.4 组织病理学变化
• 4.5 文蛤疾病预防措施
• 4.5.1 养殖环境优化
• 4.5.2 养殖模式优化
• 4.5.3 展望
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 在读期间参与发表的学术论文