论文摘要
毛囊是生长毛发的动态器官,由多种分化程度不同的表皮细胞和间充质细胞构成。毛乳头是特化的间充质细胞,在毛囊的形态发生及周期性生长调控中起着重要作用,是“毛囊周期钟”的“中心振荡器”。Wnt/β-catenin信号通路对诱导毛囊的形态发生、维持毛囊周期中干细胞增殖分化至关重要。睫毛毛囊是一种特殊的毛囊,其生长期较短而休眠期极长,因此睫毛生长缓慢。睫毛的直径是由其毛乳头决定的。目前国内外有关睫毛毛囊发育及周期调控机制的研究报道极少,几乎属于空白。研究睫毛毛囊的形态发生及其毛乳头在周期调控中的作用机制不仅对阐明上皮-间充质相互作用的分子机制具有重要的理论意义,而且对了解组织器官发育和再生具有普遍的指导意义。本试验以胎牛作为试验材料,通过对牛胚胎上眼睑组织石蜡切片进行β-catenin的免疫组化染色,定性检测了β-catenin在各胚龄胎牛睫毛毛囊中的表达,初步研究了牛睫毛毛囊形态发生的组织学变化与β-catenin的表达变化规律;同时还构建了新生荷斯坦牛睫毛毛囊生长期毛乳头cDNA表达文库。结果和结论如下:1.牛睫毛毛囊的形态发生过程与相邻的非睫毛毛囊相似,但基板和毛芽出现的时间较早。基板和毛芽于胚龄12～14周出现;毛钉出现于14～16周并于16～20周进一步分化;24～28周毛囊完全成熟。成熟睫毛毛囊的毛乳头直径较大,附属结构皮脂腺极为发达。2.β-catenin的表达变化提示其在牛睫毛毛囊基板的形成以及毛囊干细胞的分化等过程中具有重要作用。β-catenin在毛囊发育早期（12～14周）和中期（14～20周）表达于睫毛毛基、毛芽和毛钉中,其中在隆突区及毛母质中强表达;毛囊发育晚期（20～24周）及成熟期（24～28周）于隆突区、内外根鞘近隆突区强表达,而在毛母质中表达减弱。3.首次成功构建新生荷斯坦牛睫毛毛囊生长期毛乳头cDNA表达文库。经检测,所构建初级文库滴度为2.3×105pfu/mL,重组率为95%;扩增文库滴度为3.3×107pfu/mL。文库滴度>105pfu/mL,重组率大于80%,表明所构建的cDNA表达文库质量较高,为进一步通过基因芯片筛选、克隆牛睫毛囊生长期毛乳头特异性表达的基因、阐明睫毛毛囊发育中基因调控的分子机制奠定了研究基础。