论文摘要
背景和目的:丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）是丙型肝炎的致病体,丙型肝炎是世界范围内的重要传染病之一。根据世界卫生组织的数据,目前全世界约有1亿8千万HCV感染者,其中85%发展成慢性丙型肝炎,在10～20年中又有20%～50%进展成肝硬化,1%～2%发展成肝细胞癌。目前干扰素联合利巴韦林是治疗HCV感染的唯一手段,但其疗效有限,只有不到40%的患者有一定疗效,且不同的HCV基因型别对于干扰素的持续性病毒应答率亦不同。抗HCV药物开发的主要障碍在于缺乏高效的体外HCV复制细胞模型和小动物模型。近年报道的选择性双顺反子（cistron:编码一个蛋白质的一个DNA单位）亚基因组HCV RNA复制子（replicon:基因组中一个能被独立复制的DNA片段单位）系统为HCV致病机理研究及抗病毒药物评价提供了一个新的途径。尽管HCV亚基因组复制子模型对HCV致病机理研究及抗病毒药物开发具有重要意义,但建立能产生完整病毒颗粒的HCV全基因组复制子对揭示HCV完整的生活周期、病毒装配,结构蛋白对抗病毒药物的影响等将具有更重要的实际意义。HCV基因组长约9.6 kb,由于HCV基因组富含GC且具有复杂的二级结构,使得HCV全长基因组扩增至今尚未获得成功。然而HCV感染个体存在准种现象,短片段扩增、拼接构建全长基因组,有可能将不同的病毒株（variants）片段拼接在一起,使得研究病毒基因变异、获得感染性克隆和疫苗研制等工作缺乏更加准确的平台。因此采用长链RT-PCR方法用尽量少的片段,即尽可能长的片段构建HCV全长基因组将更有价值。本研究首先建立了HCV的标本库,并进行了HCV基因型别的确定,为后续研究提供足够数量的HCV标本。然后以我国主要流行的HCV基因型感染者为研究对象,建立HCV长链RT-PCR方法,构建HCV全长基因组质粒。研究共分两部分进行:第一部分为中国人HCV感染系列标本库的建立,采集系列标本,收集详实的流行病学、临床及实验室资料,旨在筛选出主要流行基因型的血清标本,为HCV全长基因组的构建提供材料;第二部分为建立长链RT-PCR的方法,旨在构建中国人HCV全长基因组质粒,为中国人复制子的建立奠定基础,将为HCV体外复制机理、细胞致病机理的