荧光探针用于神经递质、脂肪酸的测定及其应用

论文摘要

反相高效液相色谱（RP-HPLC）因其强大的分离分析能力而成为许多研究领域广泛采用的一种有效分离手段,如生物学、化学、毒物学、临床医学、食品卫生及环境科学等。该方法也是分析化学中发展最快,应用最广的方法之一,然而由于样品中待测组分含量低或其本身性质以及高效液相色谱检测器的限制,并非所有化合物都可直接用于色谱分析。因此,开发具有高灵敏度的检测方法具有重要意义。目前,该方法中使用的衍生化试剂种类繁多,用途广泛,但在实际应用中都存在着这样或那样的缺点。因此,开发能够满足实际高效液相色谱分析需要的高灵敏荧光试剂有着非常重要的意义。本论文以设计制备新型荧光衍生试剂以期提高检测灵敏度和改进现有试剂在实际分析过程中的缺陷为主导思想,从新型标记试剂的设计制备、光谱性质的鉴定、新衍生反应的开发、衍生反应条件的优化、色谱分离条件研究、质谱定量定性研究、实际样品测定等方面开展研究工作。具体工作内容如下：第一章：简述了高效液相色谱和高效液相色谱-质谱联用的研究进展和基本理论；介绍了荧光原理和化学衍生化；总结了广泛使用的荧光衍生试剂。第二章：2-[2-（7H-二苯并[a,g]咔唑-乙氧基）]-乙基氯甲酸酯（DBCEC-Cl）用于神经递质的高效液相色谱-质谱分析。建立了DBCEC-Cl荧光标记液相色谱分析法,实现了神经递质类标记,采用七种神经递质的DBCEC-Cl柱前衍生荧光检测法实现了大鼠脑脊液中神经递质的测定。第三章：两种荧光标记试剂DPPIPE和BAETS用于脂肪酸的高效液相色谱-质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化,建立脂肪酸的柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法,并将方法应用于血浆、花粉实际样品的测定。结果表明,衍生反应条件温和,衍生产率高,该方法的线性范围宽,重现性好,灵敏度高。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 高效液相色谱及柱前化学衍生化的应用进展
• 1 前言
• 2 高相液相色谱的发展现状
• 2.1 高效液相色谱理论的发展及其应用
• 2.2 高效液相色谱仪简介以及工作原理
• 2.3 HPLC的优缺点
• 2.3.1 HPLC的优点
• 2.3.2 HPLC的局限性
• 2.3.3 高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）联用技术的发展
• 3 荧光衍生化的研究
• 3.1 荧光的定义
• 3.2 荧光现象的发现
• 3.3 荧光的研究进展
• 3.3.1 荧光现象的研究进展
• 3.3.2 荧光分析仪器的研究进展
• 3.4 荧光和分子结构的关系
• 4 化学衍生
• 4.1 化学衍生法的定义
• 4.2 常用荧光探针分子
• 5 论文的主要研究内容
• 第二章 2-[2-（7H-二苯并[A,G]咔唑-乙氧基）]-乙基氯甲酸酯（DBCEC-CL）用于神经递质的高效液相色谱-质谱分析
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 标准溶液的配制
• 2.2.2 标准品的衍生
• 2.2.3 色谱与质谱条件
• 2.3 实际样品的处理
• 2.3.1 动物实验
• 2.3.2 手术
• 2.3.3 微透析与给药处理
• 3 结果与讨论
• 3.1 衍生条件的优化
• 3.2 标准品的色谱分离及质谱鉴定
• 3.3 线性回归方程、检出限和重现性
• 3.4 本实验与已报道相关衍生试剂灵敏度的比较
• 3.5 实际样品中神经递质的色谱分析
• 4 结论
• 第三章 荧光探针分子用于脂肪酸的高效液相色谱-质谱鉴定
• 第一节 新型荧光试剂DPPIPE用于脂肪酸的高效液相色谱-质谱检测
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 标准溶液的配制
• 2.2.2 标准品的衍生
• 2.2.3 色谱与质谱条件
• 2.3 实际样品的处理
• 3 结果与讨论
• 3.1 衍生条件的优化
• 3.2 标准品的色谱分离及质谱鉴定
• 3.3 线性回归方程、检出限和重现性
• 3.4 回收率和样品的测定
• 4 结论
• 第二节 花粉中脂肪酸高效液相色谱-质谱鉴定
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 标准溶液的配制
• 2.3 色谱及质谱条件
• 2.4 标准品衍生化
• 2.5 花粉中游离脂肪酸的提取
• 3 结果与讨论
• 3.1 衍生条件的优化
• 3.2 标准品的色谱分离及质谱鉴定
• 3.3 线性回归方程,检出限和重现性
• 3.4 本实验与已报道相关衍生化方法的比较
• 3.5 回收率和样品的测定
• 4 结论
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表论文
• 致谢