王晓红
（河北省保定市定州市人民医院药剂科河北保定073000）
【摘要】目的：研究分析高纯度银杏黄酮对衰老小鼠学习记忆功能的影响。方法：选取ICR小鼠140只，随机分为4组，A组注射银杏黄酮10ml/kg与D-半乳糖400mg/kg；B组注射脑蛋白水解物5mg/kg与D-半乳糖400mg/kg；C（模型组）组生理盐水0.4ml与D-半乳糖400mg/kg；D组（正常对照使用）注射生理盐水0.4ml。用药均为每日1次，连续2个月。2个月后研究分析各组小鼠学习记忆力情况。结果：在进行跳台实验中A、B两组小鼠学习记忆练习的错误次数均低于C组（t=15.05，P=0.0000）差异有统计学意义；检查小鼠脑组织中乙酰胆碱酯酶活力发现A、B两组明显低于C组（t=175.24，P=0.0000）差异有统计学意义。结论：高纯度银杏黄酮能够明显缓解因D-半乳糖导致的衰老小鼠的记忆能力，其治疗改善机制可能与小鼠脑组织中乙酰胆碱酯酶递质提升，自由基的清除以及抗脂质过氧化等相关，主要作用与脑蛋白水解质较为一致。
【关键词】高纯度；银杏黄酮；衰老小鼠；记忆功能
【中图分类号】R338.64【文献标识码】B【文章编号】1003-5028（2015）5-0026-01
高纯度银杏黄酮主要是采用特殊技术高度分解银杏叶后的提纯物，黄酮甙含量最高可达到49%，并且有酚类、萜类以及生物碱等各种有效成分，有较多的研究结果表明，高纯度银杏黄酮具有抗脂质过氧化，清除自由基，改善脑血液循环，提高脑组织代谢功能等作用，其药理作用是改善学习记忆功能。作者通过研究140只衰老小鼠，使用高纯度银杏黄酮后，分析对其记忆学习功能的影响，现将报告如下：
1一般资料与方法
1.1一般资料
2014年2月~2014年5月期间在我院实验室中进行动物实验，选取140只健康ICR小鼠，均为雄性，鼠龄3~5个月，体重27~33g，采用数字标注法随机将小鼠分为4组，每组35只，A组注射银杏黄酮10ml/kg与D-半乳糖400mg/kg；B组注射脑蛋白水解物5mg/kg与D-半乳糖400mg/kg；C组（模型组）生理盐水0.4ml与D-半乳糖400mg/kg；D组（正常对照使用）注射生理盐水0.4ml。
1.2方法
首先进行衰老模型复制，对ABC三组小鼠进行腹腔注射D-半乳糖400mg/kg，每日1次，注射2个月。随后进行给药治疗，A组小鼠腹腔注射银杏黄酮10ml/kg，B组小鼠腹腔注射脑蛋白水解物5mg/kg，C组D组小鼠腹腔注射生理盐水0.4ml。每日1次，注射2个月。观察每组小鼠活动情况、状态，并记录小鼠体重、形态变化。跳台实验：对全部小鼠进行跳台实验，首先将小鼠放置于跳台装置上，3min后通电（36V），当小鼠跳至铁栅栏则受电击，属于错误反应，若跳回安全平台则为正确。练习3min并记录错误次数，24h后再次进行实验并记录。跳台实验结束后检测记录各组小鼠脑组织中乙酰胆碱酯酶活力。
1.3统计学方法
将数据纳入SPSS19.0统计软件中进行分析，计数资料比较采用x2比较，以率（%）表示，计量资料比较采用t检验，并以（±s）表示，若（P＜0.05）则差异显著，有统计学意义。
2结果
2.1各组小鼠各项状态变化
对140只小鼠两个月后进行观察各项状态变化：C组小鼠体毛稀疏、色泽灰暗、胡须基本脱落，体型弯曲，行动迟缓，步态摇摆不定，皮下组织较薄；D组小鼠体毛浓郁，洁白有光泽，行动极为敏捷，体型正常，皮下组织丰富；A、B两组小鼠体毛较为浓密，色泽洁白明亮，行动较为敏捷，体态正常，皮下组织出现部分减少。A、B、D三组小鼠体重均高于C组小鼠（P<0.05)差异有统计学意义。
2.2各组小鼠跳台实验结果以及脑组织内乙酰胆碱酯酶活力对比结果
在进行跳台实验中A、B两组小鼠学习记忆练习的错误次数均低于C组（t=15.05，P=0.0000）差异有统计学意义；检查小鼠脑组织中乙酰胆碱酯酶活力发现A、B两组明显低于C组（t=175.24，P=0.0000）差异有统计学意义。见表1
3讨论
早在1991年龚国清等[1]研究报道，D-半乳糖对小鼠具有老化效应，本文试验中，C组（注射D-半乳糖）小鼠的体毛稀疏、色泽灰暗、胡须基本脱落，体型弯曲，行动迟缓，步态摇摆不定，皮下组织较薄，这表明对小鼠的衰老效果良好，以文献结果一致。有研究结果表明，小鼠进行练习获得记忆后，皮质、海马乙酰胆碱以及胆碱酯酶提升，拟胆碱药物具有提升学习与记忆的效果，而抗胆碱药物则可能造成学习与记忆功能损伤[2]。因此脑组织中乙酰胆碱酯酶程度与学习记忆功能息息相关。但脑组织中乙酰胆碱的含量难以检测，不过脑组织中乙酰胆碱程度与胆乙酰碱酯酶的活力呈正相关状态与胆碱酯酶的活性为负相关，因此临床研究中主要采用胆碱乙酰化酶和胆碱酯酶的活性程度检测脑组织中乙酰胆碱酯酶活力。本文研究结果显示，A组（银杏黄酮）小鼠的学习记忆功能明显高于C组（射D-半乳糖），脑组织内乙酰胆碱酯酶活力明显减少，对比C组，采用明显，有统计学意义。这表明高纯度银杏黄酮具有促进脑组织内乙酰胆碱递质活性的作用，提高了衰老小鼠的学习记忆功能。郝莉等[3]人研究结果表明，银杏叶的提纯物质能够显著缓解东莨菪碱损伤中枢M胆碱受体引发的学习记忆功能障碍情况，其主要机制可能与中枢神经系统内乙酰胆碱的质量得到增强，缓解了东莨菪碱占住胆碱能受体，促进了受体与乙酰胆碱的相关性。与本文研究结果一致。
小鼠在衰老的过程中也伴随着神经细胞逐渐死亡，主要表现为部分区域的神经细胞量急剧减少。但脑组织中各部位受到衰老影响结果不同，例如黑质与海马明显受到影响，造成的功能削减程度较大，目前神经细胞的死亡机制尚不清晰，但外国学者[4]研究后表明，与氨基酸受体过度激活或者氧自由基大量生产相关。当失血、休克时会引起谷氨酸过度产生，使氨基酸受体兴奋激活，产生神经源性一氧化氮，从而产生脂质过氧化反应，造成细胞受损。其代谢产物与DNA或RNA以及蛋白质等相关物质结合，改变膜成分，导致细胞大量死亡引起脑功能异常。本文研究中发现，各组小鼠一般的生体状态对比后，A组、B组小鼠的形态、质量明显优于C组的小鼠，A/B组小鼠体毛较为浓密，色泽洁白明亮，行动较为敏捷，体态正常，体重质量较好，无弯腰躬背情况；而C组小鼠体毛稀疏、色泽灰暗、胡须基本脱落，体型弯曲，行动迟缓，步态摇摆不定，皮下组织较薄，体重质量较轻。这都表明高纯度银杏黄酮除了能够提升衰老小鼠的学习记忆功能之外，还能够明显改善衰老小鼠的生体状态情况。但本研究因试验条件及经费所限，未进行其他试验项目，这可能造成与部分研究结果有差异。
参考文献：
[1]龚国清,徐黻本.小鼠衰老模型研究[J].中国药科大学学报.1991(02)
[2]熊平源,胡艺兰,陈慧等.银杏叶提取物对小鼠免疫功能的影响[J].数理医药学杂志,2012,25(6):724-725.
[3]郝莉,贺改英,张志雄等.银杏酮酯对小鼠学习记忆能力及海马神经炎症反应的影响[J].中国中医药信息杂志,2014,(8):49-53.
[4]LynchGS,LynchPA,DeadwylerSA.Thedemonstratofacetylcholinesterasecontainingneuronswithinthecaudatenucleusoftherat.BrainRes.1972.