酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞耐药性的逆转作用及其机制研究

论文摘要

目的：研究三肽化合物酪丝缬肽（Tyroservatide,YSV）对多药耐药肿瘤细胞耐药性的体外逆转作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法：1.应用MTS法观察人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/5-FU及人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR对化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）、阿霉素（DOX）、长春新碱（VCR）的交叉耐药性。2.‘以人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/5-FU及人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR为研究对象,应用MTS法观察YSV对细胞增殖的抑制作用；选择低细胞毒作用的YSV剂量,研究其对细胞耐药性的体外逆转作用。3.应用流式细胞术观察YSV对多药耐药细胞BEL-7402/5-FU、MCF-7/ADR细胞内阿霉素、罗丹明123蓄积量的影响。4.应用实时荧光定量PCR、Western Blot方法,观察YSV对耐药细胞BEL-7402/5-FU、MCF-7/ADR细胞中耐药基因MDR1 mRNA及其蛋白产物P-gp表达的影响；并进一步观察YSV对MDR1的调控因子PKCa蛋白表达的影响。5.应用实时荧光定量PCR、Western Blot方法,观察YSV对多药耐药细胞BEL-7402/5-FU、MCF-7/ADR细胞中其它耐药相关基因MRP1、LRP、GST-πmRNA及其蛋白表达的影响。6应用流式细胞术和DNA Ladder检测方法研究人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU其耐药性与凋亡受抑之间的关系；观察YSV与化疗药物合用时对BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响。7.应用Western Blot方法,观察YSV对人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU细胞中凋亡抑制因子Bcl-2、Bcl-xL及抑癌基因P53蛋白表达的影响。结果：1.人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU对5-FU及DOX的耐药倍数分别为287.39、5.89倍,人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR对DOX及VCR的耐药倍数分别为18.74、8.08倍。2. YSV （0.1-1.6mg/ml）对多药耐药肿瘤细胞BEL-7402/5-FU及MCF-7/ADR的增殖具有剂量依赖性抑制作用趋势。对于BEL-7402/5-FU细胞,0.8mg/ml以下浓度为低细胞毒剂量；对于MCF-7/ADR细胞,1.6mg/ml以下浓度为低细胞毒剂量。3. YSV （0.4、0.8mg/ml）在体外能够部分逆转人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU对5-FU、DOX的耐受性；YSV （0.8、1.6mg/ml）在体外能够部分逆转人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR对DOX、VCR的耐受性。4.YSV可显著增加多药耐药细胞BEL-7402/5-FU及MCF-7/ADR细胞内阿霉素、罗丹明123的蓄积量。5.YSV可显著抑制多药耐药细胞BEL-7402/5-FU及MCF-7/ADR细胞内多药耐药基因MDR1的mRNA及其蛋白产物P-gp的表达,同时抑制MDR1的调控因子PKCa的蛋白表达；YSV可显著抑制BEL-7402/5-FU及MCF-7/ADR细胞内其它耐药相关基因LRP. GST-π的mRNA及蛋白表达,降低MRP1蛋白水平。6.流式细胞术结果表明,与其亲本细胞BEL-7402相比,耐药细胞BEL-7402/5-FU能够显著抵抗5-FU的诱导凋亡作用；YSV （0.4、0.8mg/ml）与5-FU联用后,人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU的凋亡细胞数量显著增加,并形成明显的DNAladder。7.YSV可抑制人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU细胞内抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL的蛋白表达,促进抑癌基因P53的蛋白表达。结论：YSV可有效逆转耐药肿瘤细胞BEL-7402/5-FU及MCF-7/ADR对化疗药物的耐受性,部分恢复细胞对化疗药物的敏感性。YSV逆转耐药的作用机制可能是与抑制耐药蛋白P-gp的基因表达及其药物外泵功能,抑制MRP1、LRP、GST-π等耐药相关基因的表达,下调抗凋亡因子Bcl-2、Bcl-xL表达,上调抑癌基因P53表达,促进化疗药物诱导的耐药细胞凋亡有关。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 第一部分 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞耐药性逆转作用的实验研究
• 实验一 多药耐药肿瘤细胞的耐药性分析
• 实验二 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞体外增殖的影响
• 实验三 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞耐药性的逆转作用研究
• 第二部分 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞中P-gp功能及基因表达的影响
• 实验一 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞内阿霉素累积量的影响
• 实验二 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞内罗丹明123蓄积量的影响
• 实验三 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞MDR1 mRNA表达的影响
• 实验四 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞P-gp蛋白表达的影响
• 实验五 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞P-gp的调控因子PKCα蛋白表达的影响
• 第三部分 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞中其它耐药相关基因表达的影响
• 实验一 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞中MRP1、LRP、GST-πmRNA表达的影响
• 实验二 酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞中MRP1、LRP、GST-π蛋白表达的影响
• 第四部分 酪丝缬肽对人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU凋亡的作用研究
• 实验一 人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU耐药性与凋亡受抑关系的研究
• 实验二 酪丝缬肽与化疗药物合用对人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU凋亡的影响
• 实验三 酪丝缬肽对人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU中抗凋亡因子Bcl-2、Bcl-xL及抑癌基因P53蛋白表达的影响
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• ABC转运蛋白介导的肿瘤多药耐药机制及其逆转策略
• 综述参考文献
• 致谢